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超聲波細(xì)胞破碎儀的常見問題及解決辦法
**沉淀直接加樣品1buffer，再加5ul的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步 驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min就可以。 
在表達(dá)重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，*后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。 
1.會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒放好。探頭一定要接近底部，約1cm(我一般是距底部0.5mm)。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同，但你可以觀察液面，有波動(dòng)但不要太劇烈就好。 
2.破3S停10S，破個(gè)二三十次看看。 
3.變幅桿位置擺放也要注意，聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。在破碎時(shí)試著加大體積,強(qiáng)度*好不要超過60%。
4.嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說，你的方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡，*好停頓時(shí)間稍長(zhǎng)一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。 
鏈霉菌(放線菌)超聲破碎的，用的方法條件是什么？ 
前處理一般就是配置成一定濃度的菌懸液。 
使用超聲破碎時(shí)采用的具體條件是： 
(1)取**的24h培養(yǎng)液于5000r／min下離心5min收集菌體． 
(2)用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液洗滌3次，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液．置于40mL大塑料試管內(nèi)。 
(3)將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎(功率200W，1／2”探頭，破碎30s，間歇30S)。
(4)破碎液于12000r／min下高速冷凍離心30min，收集細(xì)胞碎片和上清夜。

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