基因槍的操作方法

l．材料準(zhǔn)備

在9cm2培養(yǎng)皿上鋪一薄層培養(yǎng)基，把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細(xì)胞、原生質(zhì)體等)平鋪于培養(yǎng)皿中心，直徑在3cm范圍內(nèi)。

2．金粉的處理

取60mg金粉或鎢粉置于離心管中，加入lml無(wú)水乙醇，充分振蕩3min，以9615g離心1rain，去上清，再加入lml無(wú)菌水充分混勻后，以9615g離心，重復(fù)上述步驟3次。*后，將金粉懸浮于lml無(wú)菌蒸餾水中，置4‘C或室溫下儲(chǔ)存。

3．DNA的處理

取50tA金粉懸浮液，依次加入5rd的質(zhì)粒DNA(1．0／lg～1)溶液、50／／l 0．1mol／L亞精胺(所用的溶液經(jīng)無(wú)菌**)，振蕩3rain后，在室溫下放置10min，以9615g離心10s，棄去上清液；加入250~1無(wú)水乙醇，振蕩后以9615g離心10s，棄上清液。沉淀重新懸浮于60／1l無(wú)水乙醇中，可供5槍(每槍10~1)使用。

4．基因槍的操作

基因槍的**操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行，具體步驟如下：

1)先用70％乙醇對(duì)基因槍表面及樣品室進(jìn)行**。同時(shí)，用70％乙醇將阻擋網(wǎng)和可裂圓片，微彈載體及其固定器、固定工具浸泡15min后，放在超凈臺(tái)上晾干?？闪涯て?、固定蓋、微彈載體發(fā)射裝置可用70％乙醇進(jìn)行表面**，吹干。

2)將微粒載片嵌入固定環(huán)中，取DNA及金粉的混合物加于微粒載片中心，干燥lmin左右。

    3)安裝可裂膜于其托座上，順時(shí)針擰到氣體加速器上。

4)將空間環(huán)、阻擋網(wǎng)、阻擋網(wǎng)托座、微粒載片及固定環(huán)(帶有微粒的面朝下)安裝好，旋緊蓋子，插入搶中。

    5)把樣品放在轟擊室中，關(guān)好門(mén)。

6)打開(kāi)氦氣瓶的總閥，順時(shí)針轉(zhuǎn)氦氣調(diào)節(jié)閥，使氦壓表指針的示數(shù)高于可裂膜壓力200Psi(＝1．379MPa)。

7)打開(kāi)基因槍及變壓器開(kāi)關(guān)。

8)按動(dòng)真空鍵，待真空度至26—28inHg(＝88．05～94．82kPa)時(shí)，迅速按下Hold鍵，接著按住發(fā)射鍵，并保持不動(dòng)，直到激發(fā)為止。

    9)按通氣鍵待真空表歸零后，取出樣品。

10)關(guān)機(jī)。把氦氣瓶的總開(kāi)關(guān)旋緊，打一次空槍?zhuān)押罕碇羔槡w零后，再逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)氦壓表調(diào)節(jié)??；關(guān)閉基因槍的總開(kāi)關(guān)及變壓器開(kāi)關(guān)。

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