紫外分光光度計(jì)正確測(cè)DNA濃度方法
發(fā)布時(shí)間：2014-09-10
首先，分光光度計(jì)測(cè)量的樣品必須是均一的，搖勻后再測(cè)量結(jié)果會(huì)**些。它是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。
一般用微量分光光度計(jì)比較快速簡(jiǎn)便，DNA濃度會(huì)直接在軟件上顯示，A260 / A280的比值用于評(píng)估樣品的純度， 純凈的樣品比值大于1.8，低于2.0。較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率*高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的*高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測(cè)試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者***的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
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