一、目 的：建立微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

二、適用范圍：適用于藥品及其制造過程的微生物限度檢查。

三、責(zé) 任：QC。

四、規(guī) 程：

1 微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定**制劑及其原輔料受微生物污染程度的方法，檢查項(xiàng)目包括**數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。

2 實(shí)驗(yàn)用具：電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水溫箱、試管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管架、注射器、針頭、注射器盒、研缽、75%酒精棉球、紫外燈（365nm波長(zhǎng)）。 3 培養(yǎng)基。

3.1營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸（MUG）培養(yǎng)基。

3.2培養(yǎng)基的管理、配制應(yīng)符合檢定菌、培養(yǎng)基管理規(guī)程、培養(yǎng)基配制規(guī)程。

4 試液：甲基紅試液、40%氫氧化鉀溶液、靛基質(zhì)試液。

5 稀釋劑：0.9%無菌氯化鈉溶液。

6 供試品溶液的制備：除另有規(guī)定外，取供試品10g或10ml化學(xué)膜劑為100cm（供試品如為固體，置研缽中研磨成細(xì)粉）,放入試管中，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,混勻，作為1:10的供試液。

7對(duì)照用菌液：控制菌檢查均應(yīng)作相應(yīng)已知菌的對(duì)照試驗(yàn)，對(duì)照菌株為大腸桿菌[CMCC

（B）44 102]。

取相應(yīng)菌株的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳，接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)， 培養(yǎng)18～20小時(shí)，稀釋至1:106。對(duì)照菌的加入量為50～100個(gè)。

8 檢查法。

8.1除另有規(guī)定外,**培養(yǎng)溫度為30～35℃；霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23～28℃；控制菌培養(yǎng)溫度為35～37℃。

8.2**、霉菌計(jì)數(shù)。

8.2.1平皿法。取均勻供試液，進(jìn)一步稀釋成1:10、1:102、1:103等適宜的稀釋級(jí)。分別取連續(xù)三級(jí)10倍稀釋的供試液各1ml，置直徑約90mm的平皿中，再注入約45℃的培養(yǎng)基約15ml，混勻，等凝固后，倒置培養(yǎng)，每稀釋級(jí)應(yīng)作2～3個(gè)平皿。