薄層板的制備及應(yīng)用中的問(wèn)題
關(guān)于配制CMC-Na：
先將稱(chēng)好的CMC-Na加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,再加熱煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過(guò)程中不易形成顆粒,煮沸時(shí)間短.溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實(shí)際操作中0.4％～0.5％*為實(shí)用，濃度高了將來(lái)顯色時(shí)如果有加熱過(guò)程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來(lái)的板子不結(jié)實(shí)，輕輕一碰就掉渣，不好保存，而且點(diǎn)樣時(shí)會(huì)很緊張，容易出洞.0.5%CMC-Na與水溶漲至充分，攪拌溶漲，如果不好溶漲，可在溶漲前加幾滴乙醇，比較好溶，但是盡量不加，因?yàn)榧尤胍掖己笫笴MC-Na的粘合性降低。需注意：
1）CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾天以后就會(huì)變綠，起霉。注意放置時(shí)間太長(zhǎng)的CMC-Na溶液可能會(huì)發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)，**不能再使用。
2）如果有抽濾裝置可以直接把CMC-Na溶液濾過(guò)，就可以不必等它沉淀再取上清液了（還有兩個(gè)好處一是節(jié)省CMC-Na溶液，二是抽濾過(guò)的CMC-Na溶液的時(shí)候不必?fù)?dān)心會(huì)把下層的不溶物倒出來(lái)了?。?。有個(gè)辦法過(guò)濾CMC-Na溶液，就是在布氏漏斗上平鋪薄薄的一層脫脂棉，用蒸餾水潤(rùn)濕脫脂棉，啟動(dòng)真空泵，抽緊后就可以放心大膽的倒CMC-Na溶液了，保證濾過(guò)的溶液澄清透明，而且長(zhǎng)時(shí)間放置不沉淀。
3）CMC-Na是一種高分子材料,而高分子材料的溶解必然都會(huì)有一個(gè)溶漲、溶解的過(guò)程,所以配制的時(shí)候,應(yīng)該將稱(chēng)好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開(kāi)平鋪,這樣能夠充分浸潤(rùn),使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解,當(dāng)然如果不是很急著用的話(huà)也完全可以,直接用水泡著放那,估計(jì)十天半月的也可以用了.
在CMC-Na的溶解過(guò)程中，也可以使用可進(jìn)行加熱操作的磁力攪拌器，大概攪拌5小時(shí)，應(yīng)該可得到滿(mǎn)意的效果。而且這樣就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清。CMC-Na的處理也可進(jìn)行離心，5000rpm離心20min。倒出上清液，（非常清，也同時(shí)消除了過(guò)濾過(guò)程中可能發(fā)生的污染。）更難能可貴的是，可以收集下面沒(méi)有充分溶解的CMC-Na。繼續(xù)加到水中，還可以繼續(xù)配制。
關(guān)于薄層板的要求：
1.載板要求平滑清潔，沒(méi)有劃痕，在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈。
2.怎么樣的玻璃算是干凈：用洗潔精浸泡也好，用酸浸泡也好，當(dāng)你覺(jué)得洗干凈的時(shí)候，拿在手上立起來(lái)，如果發(fā)現(xiàn)水不是呈股流下，而是呈瀑布狀態(tài)流下，那么說(shuō)明你的玻璃板已經(jīng)洗干凈了。其實(shí)真正洗干凈的玻璃，很快就可以晾干的。
3．怎樣清洗用過(guò)后的薄層板：試著用了洗衣粉、洗潔精，反復(fù)洗了數(shù)遍，仍然掛水珠。鋪制薄層板要求玻璃板干凈、整潔、不掛水珠的。建議用洗液泡，如果還解決不了那就只好放棄這塊玻璃板了，有說(shuō)可以用鹽酸的。
關(guān)于研磨及鋪板要求：
1.硅膠的研磨，當(dāng)然是一個(gè)方向了，可以適量的加入一定量的無(wú)水乙醇或丙酮來(lái)消泡，也可以適當(dāng)攪拌后在干凈容器內(nèi)超聲，效果都是不錯(cuò)的。手工鋪硅膠的用量一般10*20的約3～4克，硅膠和CMC-Na的用量一般是1：2.8～3，具體根據(jù)要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
2．依據(jù)薄層板使用需要，將適量研好的吸附劑倒到薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻，傾斜薄層板，使吸附劑流至薄層板一側(cè)，待吸附劑蓄積一定量后，再反向傾斜薄層板，使吸附劑回流然后是另外兩個(gè)方向，重復(fù)操作，后輕顛幾下薄層板即可。
3.將載玻片置于平臺(tái)上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。鋪板時(shí)，可以順著板中間倒，也可以順著某個(gè)邊緣倒，也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上，倒時(shí)也要注意不要引入小氣泡。如有需要，可以雙手10個(gè)指頭托住玻璃板，有節(jié)奏的顛簸，使得糊狀硅膠分布勻稱(chēng)。尤其是載板的四個(gè)角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒(méi)有氣孔。薄層板鋪好后一定要放置在平的臺(tái)面上，否則難保證板面硅膠的厚度均勻。
4.鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度鼓風(fēng)干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過(guò)快在使用的過(guò)程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象不利于分離。
關(guān)于裂板：
板子會(huì)裂口，一則可能是因?yàn)楣枘z的比例太大，二則可能是板子要在常溫下晾干后，才能在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的。關(guān)于活化出現(xiàn)裂板、爆板的問(wèn)題，我從沒(méi)有遇上過(guò)?；罨沂沁@樣處理的，不要等到溫度達(dá)到100度，而是設(shè)好溫度后就將板子放在干燥箱，然后再通電加熱，達(dá)到*高溫度后停留5分鐘左右即可。這樣水分是慢慢由內(nèi)而外散發(fā)，而不是由外向內(nèi)散發(fā)，避免了表面成膜，里面還在散發(fā)水氣，豈有不裂、不爆的道理！
關(guān)于展開(kāi)劑：
分離的樣品酸性比較大，一般在展開(kāi)劑中加酸。加甲酸是因?yàn)樵摌悠肥撬嵝缘?，加酸的量和該物質(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因?yàn)闃悠肥擒疹?lèi)的用酸水做一下緩沖，目的就是讓斑點(diǎn)圓滑，不脫尾，展距良好。飽和非常重要，邊緣效應(yīng)很?chē)?yán)重的不妨用下端浸在展開(kāi)劑中的濾紙上，貼在展開(kāi)缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會(huì)好一些。
1）在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；
2）以展開(kāi)劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開(kāi)劑平衡時(shí)間的長(zhǎng)短，一般平衡時(shí)間在30分鐘即可。
3）展開(kāi)劑比如氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6），有機(jī)溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在這個(gè)展開(kāi)劑中，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例；如極性太小，可適當(dāng)增大甲醇比例。氯仿：甲醇：氨水10:1:0.6 和20：2：1.2極性肯定是相同的。另外還有一個(gè)問(wèn)題，這個(gè)展開(kāi)劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開(kāi)劑的平衡和層析缸的密封。 不同的展開(kāi)系統(tǒng)意思是其中至少應(yīng)該有一種溶劑不同（*好是不同類(lèi)組的溶劑），而不是比例不同?；蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ唷?/span>
關(guān)于點(diǎn)樣：
點(diǎn)樣管點(diǎn)樣時(shí)食指放在其上端，當(dāng)點(diǎn)樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動(dòng)上端的食指，溶液自然從點(diǎn)樣管出來(lái)，迅速提起點(diǎn)樣管，就這樣反復(fù)操作點(diǎn)出的斑點(diǎn)既小又均勻。但要提出樣品溶液不能太濃，濃度太大，點(diǎn)下的樣品不能被硅膠很好的吸收，不利于分離。
便宜的進(jìn)樣器（大約10幾塊錢(qián)吧，10μl即可），可將針尖打磨圓滑，用銼一點(diǎn)一點(diǎn)銼，這樣點(diǎn)樣的時(shí)候樣品溶液不容易沿針尖上行（甲醇溶液都這樣），并且針尖不會(huì)刺破已經(jīng)鋪好的薄層板。當(dāng)然，點(diǎn)樣的時(shí)候手不能抖動(dòng)。動(dòng)作要輕，這些要領(lǐng)在于意會(huì)，逐漸鍛煉。要磨平微量進(jìn)樣器的針尖，簡(jiǎn)單的方法就是，在展開(kāi)缸的蓋子上輕磨（當(dāng)然是靠近中間部分），就很快能解決問(wèn)題，且很平滑。
關(guān)于展開(kāi)：
TLC中樣品拖尾現(xiàn)象是什么原因，該如何解決?TLC中樣品跑成幾乎為一條線(xiàn),斑點(diǎn)沒(méi)有清晰的分離,這是什么原因造成的，一般情況下該如何解決?
造成問(wèn)題的原因基本相同： a、對(duì)于一些具有酸堿性的化學(xué)成分，在溶液中部分電離，事實(shí)上展開(kāi)時(shí)存在分子、離子兩種狀態(tài)，以中性的有機(jī)試劑展開(kāi)必然會(huì)出現(xiàn)兩種層析行為，造成脫尾甚至是一條線(xiàn)。b、展開(kāi)劑選擇不當(dāng) c、點(diǎn)樣量過(guò)大。
樣品超載解決辦法：a、在展開(kāi)劑中加幾滴甲酸或冰醋酸； b、展開(kāi)時(shí)以氨水飽和 c、減少點(diǎn)樣量d、參考文獻(xiàn)，調(diào)整展開(kāi)劑種類(lèi)比例 。
二次展開(kāi)是依據(jù)樣品定的，但肯定要在**次展開(kāi)后，將板晾干或吹干，再放入另一種展開(kāi)劑中展開(kāi)，有的樣品二次展開(kāi)還要換展開(kāi)方向，和原方向垂直。所以要以實(shí)際分離樣品需要而定。一般是因?yàn)闃悠烦煞侄?，極性差別大。
關(guān)于顯色：
在工作中研究過(guò)用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC-Na的板都易糊，尤其是溫度高于100度時(shí)，要嚴(yán)格控制加熱顯色的時(shí)間。后改用不加CMC-Na輔的水板來(lái)作，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC-Na易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺(jué)輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1：3.5左右，而且研磨后要盡快涂布，不然易于凝固而難于涂布。但不加CMC-Na輔的板又太軟，點(diǎn)樣時(shí)容易點(diǎn)出洞，有個(gè)好辦法是將CMC-Na的濃度調(diào)至0.1%，這樣就不易烘黑的。
附：
1. 吸附層析的基本原理是什么？
吸附層析是將吸附劑涂布于玻璃板或金屬板上成為一薄層（0.25～1mm），待分離的試液點(diǎn)在薄層的一端，離邊緣一定距離處，然后在層析缸中用適宜的展開(kāi)劑展開(kāi)。由于吸附劑對(duì)不同物質(zhì)具有不同的吸附能力，因此當(dāng)展開(kāi)劑流過(guò)時(shí)，不同物質(zhì)就在吸附劑和展開(kāi)劑之間發(fā)生連續(xù)不斷的吸附，解吸，再吸附，再解吸。吸附力強(qiáng)的物質(zhì)相對(duì)地移動(dòng)得慢些，吸附力較弱的物質(zhì)則相對(duì)地移動(dòng)得快些，這樣經(jīng)適當(dāng)時(shí)間后，試樣組分就彼此相互分離了。
2. 薄層板的涂布要**什么，為什么要這樣做？
首先制備薄層板所用的玻璃板必須表面光滑，潔凈不帶油膩，并晾干。然后在硅膠G中加入適量的蒸餾水研磨成均勻無(wú)氣泡的薄漿狀溶液，迅速倒在玻璃板上，隨即輕輕搖動(dòng)玻板，把硅膠涂布均勻，使它無(wú)氣泡，并保持在水平位置上陰干，若涂布不均勻或有氣泡，待干燥后，就會(huì)產(chǎn)生高低不平，或在活化時(shí)氣泡破裂，形成小空洞，這樣都影響展開(kāi)和分離。
3. 薄層板為何要進(jìn)行“活化”？
吸附劑的活性和含水量有密切關(guān)系，含水較多，吸附能力就大為減弱，因此通常總把吸附劑在一定溫度下烘一定時(shí)間，以驅(qū)除水分，增強(qiáng)吸附能力，改善薄層板的分離效果，即所謂的“活化”。
4. 點(diǎn)樣的要**什么，為什么要這樣做？
點(diǎn)樣時(shí)用玻璃毛細(xì)管吸取試液適量，垂直地輕微接觸薄層板表面（注意防止損壞硅膠層）。樣品溶液擴(kuò)展開(kāi)來(lái)的斑點(diǎn)直徑應(yīng)小于5mm，二相鄰斑點(diǎn)中心間距應(yīng)大于15mm。若斑點(diǎn)易擴(kuò)散，則可先點(diǎn)上少許試液，待斑點(diǎn)干后，再點(diǎn)**次，因?yàn)辄c(diǎn)樣斑點(diǎn)大，會(huì)引起分離后的斑點(diǎn)擴(kuò)散，影響展開(kāi)后的分離度。若二斑點(diǎn)中心間距太小，展開(kāi)中可能產(chǎn)生相鄰斑點(diǎn)的相互重疊。點(diǎn)樣點(diǎn)的起始線(xiàn)應(yīng)在距玻璃板底邊2cm處，防止因點(diǎn)樣太低而原點(diǎn)直接浸入展開(kāi)劑中。點(diǎn)樣斑點(diǎn)離板邊距離應(yīng)大于1.5cm，否則會(huì)因邊緣溶劑的揮發(fā)，使斑點(diǎn)隨之偏離而產(chǎn)生邊緣效應(yīng)。
5. 層析缸為何要先用展開(kāi)劑飽和？
若層析缸未先為展開(kāi)劑飽和，則由于展開(kāi)劑中各種溶劑的揮發(fā)度不同，在層析過(guò)程中，隨著展開(kāi)劑的不斷揮發(fā)，會(huì)使缸內(nèi)展開(kāi)劑組成不斷改變，而使展開(kāi)劑的極性發(fā)生改變，從而使各種組分的Rf值發(fā)生改變，分離受到影響。