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技術(shù)文章

紫外分光光度計測蛋白濃度的計算方法
紫外分光光度計對大多數(shù)人來說是一個非常奇怪的詞,但是對于技術(shù)人員如何更好地使用紫外分光光度計和高效充分,測量對象的選擇匹配的*實用的計算方法。
實業(yè)有限公司。上海經(jīng)常支付大量的紫外分光光度計通過回訪客戶,與客戶的需求,通過專業(yè)技術(shù)人員的反復(fù)實驗,測量結(jié)果快速、準(zhǔn)確的計算方法,參考如下
紫外分光光度計法
經(jīng)驗公式測定蛋白質(zhì)濃度的稀溶劑:蛋白質(zhì)肽鍵在200 - 250海里有強(qiáng)壯的紫外吸取。光吸取強(qiáng)度正比于在一定濃度范圍內(nèi),波長越短,光吸取越強(qiáng)。如果使用215 nm可以減少干擾和光散射,與215 nm和225 nm)光吸取差異與單長測量相比,可以減少蛋白質(zhì)引起的誤差,因此,稀溶劑中蛋白質(zhì)含量的測定,可以選擇215 nm和225 nm)光吸取方法
蛋白質(zhì)的稀溶劑不能使用280 nm由于低水平的光吸取測量,使用215 nm - 225 nm吸取值,之間的區(qū)別標(biāo)準(zhǔn)曲線方法確定蛋白質(zhì)的稀溶劑的濃度。
蛋白質(zhì)與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn),制成20 ~ 100毫克/毫升一系列5.0毫升的蛋白質(zhì)溶劑,215 nm和215 nm)測定吸光度值,并計算微分吸取:
可憐的d = a215 - a225吸取
吸取**d為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度水平坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測量未知樣品的吸取差,可以檢測到未知樣品的蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
這種方法在20 ~ 100毫克/毫升蛋白質(zhì)濃度范圍,蛋白質(zhì)濃度和吸光度成正比,氯化鈉,(nh4)2 so4、磷酸和0.1米,硼酸和三羥甲基氨基甲烷緩沖液,沒有顯著的干擾效果,但0.1 n氫氧化鈉,0.1醋酸,琥珀酸、鄰苯二甲酸,***酸鹽緩沖215納米的光吸取值較大,必須已經(jīng)跌破0.005濃度沒有顯著的影響。