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熒光Elispot圖像分析儀的重要性
 
我們知道，通過熒光Elispot圖像分析儀可以提供陽(yáng)性細(xì)胞頻率的數(shù)據(jù)。也就是說，在給定細(xì)胞群體當(dāng)中，我們可以知道有多少細(xì)胞在分泌細(xì)胞因子。但是另一方面，我們也希望知道這些細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的相對(duì)數(shù)量。尤其是在經(jīng)過某些處理的情況下，陽(yáng)性細(xì)胞的頻率沒有變化，但是細(xì)胞的平均分泌量增加了。我們也希望ELISPOT檢測(cè)能夠提供這方面的數(shù)據(jù)。這種數(shù)據(jù)的獲得就依賴于ELISPOT 圖像分析儀的斑點(diǎn)光密度分析功能。手工計(jì)數(shù)是無(wú)法獲得的。

那么，如何來(lái)確定每個(gè)斑點(diǎn)代表的細(xì)胞因子數(shù)量呢？顯然斑點(diǎn)的面積可以作為一個(gè)度量，細(xì)胞因子分泌越多，斑點(diǎn)就越大。反之亦然。另外，斑點(diǎn)顏色深淺（也稱為：光密度）也可以作為一個(gè)度量，細(xì)胞因子分泌越多，斑點(diǎn)顏色就越深，反之亦然。打一個(gè)簡(jiǎn)單的比方，把一個(gè)斑點(diǎn)比作一座山峰，斑點(diǎn)的面積就是山峰的占地面積，斑點(diǎn)的深淺就是山峰的高度，細(xì)胞因子的總量就是山峰的體積。那么經(jīng)過一個(gè)簡(jiǎn)單的數(shù)學(xué)微積分處理，就可以根據(jù)每個(gè)面積單元的高度而把山峰的重體積積分出來(lái)。ELISPOT斑點(diǎn)光密度定量就使用的這個(gè)原理。

這是BioReader 4000光密度分析報(bào)告。它可以提供的信息有：孔的位置、每孔的斑點(diǎn)數(shù)目、該孔斑點(diǎn)的平均光密度（Average Opt. Density）、該孔斑點(diǎn)的總面積（Cumulated values area）、該孔相對(duì)細(xì)胞因子分泌總量（TOD，即光密度總值）。
 


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