反相色譜法
一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、異丙醇、乙腈、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調(diào)節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用*為廣泛,據(jù)統(tǒng)計,它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。 隨著柱填料的快速發(fā)展,反相色譜法的應(yīng)用范圍逐漸擴大,現(xiàn)已應(yīng)用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離,常用緩沖液控制流動相的pH值。但需要注意的是,C18液相色譜柱和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8),太高的pH值會使硅膠溶解,太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH1.5~10范圍操作。
正相色譜法
采用極性固定相;流動相為相對非極性的疏水性溶劑,常加入乙醇、四氫呋喃、異丙醇、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。