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技術(shù)文章

肽的溶解性及溶解方法
肽的溶解性
根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，溶解肽是一個(gè)很重要的環(huán)節(jié)。如果溶解不當(dāng)可能導(dǎo)致肽損失或者實(shí)驗(yàn)失敗。肽的溶解性主要取決于肽的序列，所以，如果實(shí)驗(yàn)允許，肽序列中至少應(yīng)包含20%的帶電殘基以增加其溶解度。
 
在使用之前，客戶(hù)可以遵循以下三個(gè)基本原則來(lái)選擇合適的溶劑溶解多肽。首先，所選溶劑一定能充分溶解多肽。其次，所選溶劑能與實(shí)驗(yàn)條件兼容，最后，所選溶劑不能與肽反應(yīng)，也不能使肽降解。只要肽的量允許，可以先用少部分肽溶解，然后再將全部樣品溶解。如果需要從溶劑中回收肽,可以選擇一種初始溶劑使其在凍干后容易去除。
 
以下建議或許對(duì)您溶解肽有所幫助：
1.    少于5個(gè)氨基酸的肽一般溶于水溶液，強(qiáng)疏水的氨基酸（W，I，L，F(xiàn)，M，V，Y）除外。
2.    如果帶電氨基酸平均分布于全部序列中，那么含有＞25%帶電氨基酸（E，D，K，R，H）的親水肽和含有＜25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的純化系統(tǒng)一般為0.1%TFA/水和0.1%TFA/CAN。因此，如果肽溶解在沒(méi)有緩沖能力或者緩沖能力很弱的緩沖液中，結(jié)果可能導(dǎo)致肽溶液呈酸性。在使用別的方法溶解肽時(shí)務(wù)必使溶劑的pH值近乎中性。酸性肽（E+D殘基數(shù)多于K+R+H殘基數(shù)）和堿性肽（K+R+H殘基數(shù)多于E+D殘基數(shù)）在中性pH值條件下比在酸性pH值下更易于溶解。
3.    疏水氨基酸含量為50%～75%的肽，即使序列中含有25%帶電氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解。最好先把肽溶于最少量的強(qiáng)溶劑（如：DMF，ACN，異丙醇，乙醇，乙酸，4-8M GdnHCl或尿素，DMSO（序列中沒(méi)有C，W，M時(shí)），及其它類(lèi)似的有機(jī)溶劑，最好將溶解肽的有機(jī)溶劑緩慢地逐滴加入水溶液中。如果溶液變渾濁，可能是達(dá)到了溶解極限，繼續(xù)溶解就沒(méi)什么用了。需要注意的是，最開(kāi)始選擇的溶劑應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)兼容。
4.    疏水氨基酸含量＞75%的強(qiáng)疏水肽一般也不溶于水溶液。此類(lèi)肽也應(yīng)該先用強(qiáng)溶劑（如：TFA，甲酸）溶解，如果將其加入到水溶液中也可能產(chǎn)生沉淀。最后的肽溶液可能需要高濃度的有機(jī)溶劑使之變性，而有機(jī)溶劑一般不用于活細(xì)胞的生物功能研究。
5.    S，T，E，D，K，R，H，N，Q，Y含量高（＞75%）的多肽序列容易形成多余的分子間氫鍵網(wǎng)絡(luò)，在濃的水溶液中容易形成凝膠。此類(lèi)肽可以用步驟3所述方法溶解。
 
為了減少溶解中可能出現(xiàn)的問(wèn)題，建議從設(shè)計(jì)上和序列上多考慮，以改善肽的溶解度。
 
肽的溶解方法
用哪種溶劑溶解合成肽一直是困擾多肽工作者的一個(gè)難題。根據(jù)不同的氨基酸序列，可以參考以下方法來(lái)溶解合成肽。最好是先將少量肽用水溶液溶解，不要一次將全部樣品都溶解掉。
1.    將酸性氨基酸Asp （D），Glu （E）和C端-COOH.的值定為-1。
2.    而將堿性氨基酸Arg （R），Lys （K），His （H）的值定為+1。
3.    計(jì)算肽中全部電荷量。
4.    如果肽的全部電荷為正值，則肽呈堿性,可以先用水溶解。如果肽不溶于水，可以用10%乙酸或者更高濃度的乙酸溶解。如果肽一點(diǎn)都不溶，加入TFA（<50 ul）助溶,并用去離子水稀釋至1ml。
5.    如果肽的全部電荷為負(fù)值，則肽呈酸性，可以先用水溶解。如果肽不溶于水，，加入NH4OH（<50 ul） 助溶，并用去離子水稀釋至1 ml。
6.    如果肽的全部電荷為0，則肽呈中性。中性肽需要用乙腈、甲醇、異丙醇等有機(jī)溶劑來(lái)溶解，也可以加入變性劑（如：尿素、鹽酸胍等）。
實(shí)例：
KRLMKSIEVIMPL: （+3） + （-2） = +1。此條肽呈堿性。見(jiàn)以上步驟4。
LVKMKSIEDPDCE: （+2） + （-5） = -3。此條肽呈酸性。見(jiàn)以上步驟5。
MVSRKDLVEHRDM: （+4） + （-4） = 0。此條肽呈中性。見(jiàn)以上步驟6。

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