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技術(shù)文章

酵母總RNA提取方法
問： 請(qǐng)問大家提取酵母的總RNA都用什么方法？有好用的試劑盒嗎？酵母總RNA提取應(yīng)該注意什么？
答：使用熱酚法抽提酵母RNA,很好用，至今沒有失敗過。
(1)  將酵母細(xì)胞培養(yǎng)在3ml選擇性培養(yǎng)基中，30℃過夜旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。
(2)  稀釋過夜培養(yǎng)的菌液，重新在10ml培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。
(3)  OD600達(dá)到1.0時(shí)，收菌，4000rpm/min離心5min,棄培養(yǎng)基。
(4)  將細(xì)胞懸浮于400μl AE緩沖液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 調(diào)整pH值至5.2）。
(5)  加入1/10體積的10% SDS，充分混合。
(6)  加入等體積在65℃預(yù)熱的酸性酚（pH4.5），混合。
(7)  65℃加熱5min，冰上放置10min。
(8)  在室溫下8000rpm/min離心10min。
(9)  取水相,加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min離心8min。
(10)  取水相，加入等體積氯仿/異戊醇（49∶1）10000rpm/min離心8min。
(11)  加入1/10體積3M pH5.2的醋酸鈉，2.5倍體積的純乙醇，-20℃過夜沉淀。
(12)  沉淀樣品于4℃離心5min，去除液體。
(13)  在冰上干燥RNA（放置15min），最后用適量DEPC水溶解RNA。

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