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第11年
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產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
人DHVD3（1,25二羥基維生素D3） ELISA KiT(酶聯(lián)**試劑盒) DHVD3（1,25二羥基維生素D3），1, 25-dihydroxyvitamin D3，1,25二羥基維生素D3，DHVD3（1,25二羥基維生素D3）是維生素D在體內(nèi)的高度活性形式，皮膚中的7脫氫膽固醇在陽光或紫外光照射下轉(zhuǎn)化成維生素D3，
詳情介紹：
人DHVD3（1,25二羥基維生素D3） ELISA KiT(酶聯(lián)**試劑盒) 工作原理】
DHVD3（1,25二羥基維生素D3），1, 25-dihydroxyvitamin D3，1,25二羥基維生素D3，DHVD3（1,25二羥基維生素D3）是維生素D在體內(nèi)的高度活性形式，皮膚中的7脫氫膽固醇在陽光或紫外光照射下轉(zhuǎn)化成維生素D3，在肝經(jīng)25羥化酶系和腎臟1α羥化酶羥化作用下形成DHVD3（1,25二羥基維生素D3），是其在機體內(nèi)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的基本形式。DHVD3（1,25二羥基維生素D3）是**癥活動的天然調(diào)節(jié)劑，不僅能預(yù)防MS的發(fā)生，還可降低**的活動度，并且適當(dāng)?shù)难帩舛冗€可降低并發(fā)癥（骨折及肌無力等）的發(fā)生。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)**吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體為多克隆DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體。檢測相DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體也為多克隆DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
【每套試劑盒中內(nèi)容】(96T)
材料 數(shù)量
標準品 96T(2vial)
預(yù)包被DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體的96孔板 96T（8×12）
生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體 96T (1:100)
濃縮ABC（親和素-過氧化物酶復(fù)合物） 96T (1:100)
樣品稀釋液 96T×2
DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體稀釋液 96T×1
ABC稀釋液 96T×1
TMB顯色液A 96T×1
TMB顯色液B 96T×1
TMB終止液 96T×1
ELISA專用TBS洗滌液 96T×1(1:25)
【需要而未提供的試劑和器材】
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規(guī)格酶標儀。
3． 自動洗板機。
4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendorf管。
【注意事項】
1． 從-20℃取出的試劑盒，*好在4℃解凍過夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時出現(xiàn)的分層，否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2． 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3． 配制各種試劑時，切記混勻！
4． 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
5． 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
6． 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活！
7． 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
【樣品的準備和保存】
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
【樣品稀釋的一般原則】
用戶須查閱文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。
【試劑的準備和保存】
A. 標準品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，徹底溶解混勻后做倍比稀釋。
稀釋后的標準品在2小時內(nèi)使用。
B．生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體工作液：在使用前2小時內(nèi)準備。
1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體加DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準備：在使用前1小時內(nèi)準備。
1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實配時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
D. TMB顯色工作液的準備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。
【操作程序】
1． 確定本次檢測所需的已包被DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體的酶標板孔數(shù)目。
2． 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3． 酶標板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4． 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5． 將準備好的生物素DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7． 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)*長不要超過30分鐘）。
10． 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。
【操作程序總結(jié)】：
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，37℃反應(yīng)90分鐘
洗板2次，加入生物素化DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體工作液，37℃反應(yīng)60分鐘
洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應(yīng)
加入TMB終止液
30分鐘之內(nèi)讀OD值
計算標本待測因子含量
【檢測范圍】：1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】： ＜3pg/ml
【特異性】： 系統(tǒng)和其它因子無交叉反應(yīng)。
【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]
【有效期】： 12個月（-20℃）。
【用途】： 用于體外定量分析液體標本（通用型）。
【REFERENCES】
1． PARK C W. OH Y S.SHIN Y S Intravenous calcitriol regresses myocardial hypertrophy in hemodialysis patients with secondary hyperparathyroidism 1999.
2． MOHTAI M. YAMAMOTO T Smooth muscle cell proliferation in the rat coronary artery induced by vitamin D 1987.
3． CARTHY E P.YAMASHITA W.HSU A 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 and rat vascular smooth muscle cell growth 1989.
4． SHOJI T.NISHIZAWA Y.NISHITANI H Impaired metabolism of high density lipoprotein in uremic patients 1992.
5． LIM P S.HUNG T S.YEH C H Effects of treatment of secondary hyperparathyroidism on the lipid profile in patients on hemodialysis 1998.
6． 0SHOJI T. FUKUMOTO M. KIMOTO E Antibody to oxidized low-density lipoprotein and cardiovascular mortality in end-stage renal disease 2002.
DHVD3（1,25二羥基維生素D3），1, 25-dihydroxyvitamin D3，1,25二羥基維生素D3，DHVD3（1,25二羥基維生素D3）是維生素D在體內(nèi)的高度活性形式，皮膚中的7脫氫膽固醇在陽光或紫外光照射下轉(zhuǎn)化成維生素D3，在肝經(jīng)25羥化酶系和腎臟1α羥化酶羥化作用下形成DHVD3（1,25二羥基維生素D3），是其在機體內(nèi)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的基本形式。DHVD3（1,25二羥基維生素D3）是**癥活動的天然調(diào)節(jié)劑，不僅能預(yù)防MS的發(fā)生，還可降低**的活動度，并且適當(dāng)?shù)难帩舛冗€可降低并發(fā)癥（骨折及肌無力等）的發(fā)生。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)**吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體為多克隆DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體。檢測相DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體也為多克隆DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體先后加入酶標板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
【每套試劑盒中內(nèi)容】(96T)
材料 數(shù)量
標準品 96T(2vial)
預(yù)包被DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體的96孔板 96T（8×12）
生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體 96T (1:100)
濃縮ABC（親和素-過氧化物酶復(fù)合物） 96T (1:100)
樣品稀釋液 96T×2
DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體稀釋液 96T×1
ABC稀釋液 96T×1
TMB顯色液A 96T×1
TMB顯色液B 96T×1
TMB終止液 96T×1
ELISA專用TBS洗滌液 96T×1(1:25)
【需要而未提供的試劑和器材】
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規(guī)格酶標儀。
3． 自動洗板機。
4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendorf管。
【注意事項】
1． 從-20℃取出的試劑盒，*好在4℃解凍過夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時出現(xiàn)的分層，否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2． 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3． 配制各種試劑時，切記混勻！
4． 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
5． 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
6． 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活！
7． 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
【樣品的準備和保存】
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
【樣品稀釋的一般原則】
用戶須查閱文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細記錄。
【試劑的準備和保存】
A. 標準品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，徹底溶解混勻后做倍比稀釋。
稀釋后的標準品在2小時內(nèi)使用。
B．生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體工作液：在使用前2小時內(nèi)準備。
1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素標記DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體加DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準備：在使用前1小時內(nèi)準備。
1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實配時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
D. TMB顯色工作液的準備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。
【操作程序】
1． 確定本次檢測所需的已包被DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體的酶標板孔數(shù)目。
2． 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3． 酶標板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4． 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5． 將準備好的生物素DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7． 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)*長不要超過30分鐘）。
10． 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。
【操作程序總結(jié)】：
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，37℃反應(yīng)90分鐘
洗板2次，加入生物素化DHVD3（1,25二羥基維生素D3）抗體工作液，37℃反應(yīng)60分鐘
洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應(yīng)
加入TMB終止液
30分鐘之內(nèi)讀OD值
計算標本待測因子含量
【檢測范圍】：1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】： ＜3pg/ml
【特異性】： 系統(tǒng)和其它因子無交叉反應(yīng)。
【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]
【有效期】： 12個月（-20℃）。
【用途】： 用于體外定量分析液體標本（通用型）。
【REFERENCES】
1． PARK C W. OH Y S.SHIN Y S Intravenous calcitriol regresses myocardial hypertrophy in hemodialysis patients with secondary hyperparathyroidism 1999.
2． MOHTAI M. YAMAMOTO T Smooth muscle cell proliferation in the rat coronary artery induced by vitamin D 1987.
3． CARTHY E P.YAMASHITA W.HSU A 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 and rat vascular smooth muscle cell growth 1989.
4． SHOJI T.NISHIZAWA Y.NISHITANI H Impaired metabolism of high density lipoprotein in uremic patients 1992.
5． LIM P S.HUNG T S.YEH C H Effects of treatment of secondary hyperparathyroidism on the lipid profile in patients on hemodialysis 1998.
6． 0SHOJI T. FUKUMOTO M. KIMOTO E Antibody to oxidized low-density lipoprotein and cardiovascular mortality in end-stage renal disease 2002.
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