1. cDNA產(chǎn)量的很低，可能的原因： RNA模板質(zhì)量低
對mRNA濃度估計過高
反應(yīng)體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足
同位素磷32過期
反應(yīng)體積過大，不應(yīng)超過50μ
2. 擴增產(chǎn)物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺
*常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系
與反應(yīng)起始時RNA的總量及純度有關(guān)
建議在試驗中加入對照RNA
**鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進行PCR擴增時，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10
3. 產(chǎn)生非特異性條帶
用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶，則需要用DNase I重新處理樣品。
在PCR反應(yīng)中，非特異的起始擴增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進行退火，降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。
由于mRNA剪切方式的不同，根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。
尊敬的客戶：
本公司有氘燈、二手儀器、DNA合成儀等產(chǎn)品，您可以通過網(wǎng)頁撥打本公司的服務(wù)專線了解更多產(chǎn)品的詳細信息，至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠為您服務(wù)！