設(shè)計(jì)用于合成結(jié)構(gòu)上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動(dòng)化儀器。一般應(yīng)用于固相合成法,每次將一個(gè)核苷酸加到所接長的寡核苷酸鏈上,加入每一個(gè)核苷酸都利用相同的化學(xué)反應(yīng)與相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。所用化學(xué)反應(yīng)和操作細(xì)節(jié)隨不同的儀器而改變,*廣泛應(yīng)用的方法是DNA合成的磷酸酰胺法。
(一)試劑驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)
一般地,DNA 合成儀采用一定壓力的惰性氣體(氬氣)或氮?dú)饧半姶砰y組驅(qū)動(dòng)液體試劑,也可采用氦氣驅(qū)動(dòng)試劑。某些合成儀采用slider block滑塊系統(tǒng)及精密蠕動(dòng)泵,可不采用氣體為驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)。采用氣體及電磁閥驅(qū)動(dòng)液體試劑時(shí),需首先將管路系統(tǒng)電磁閥前段,含試劑瓶組中壓力加壓到規(guī)定氣壓,通過合成管理軟件或手動(dòng)打開電磁閥(一般打開時(shí)間為數(shù)ms),即可驅(qū)動(dòng)液體試劑到所需的合成柱中。
(二)試劑和堿基瓶組
DNA合成儀一般需堿基瓶組及試劑瓶組。試劑瓶組一般*少為6個(gè),含脫保護(hù)劑(Deb)、活化劑(act)、蓋帽試劑A(capA)、蓋帽試劑B(capB)、氧化劑(OXI)及洗脫乙腈(ACN),每種儀器一般都多設(shè)置1-2個(gè)試劑瓶位,用于特殊產(chǎn)物的合成。堿基瓶組一般*少為4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)堿基(A/C/G/T),同時(shí)搭配2-多個(gè)特殊堿基瓶位,用于熒光標(biāo)記等合成。
(三)壓力管路及輸送管路
DNA 合成儀的一般原則需要保持內(nèi)外氣體隔絕,因此無論試劑瓶、堿基瓶均需密封保持一定壓力。所有壓力管路目前均采用特氟龍導(dǎo)管,直徑為1/16—1/8吋。每個(gè)瓶子都有一個(gè)氬氣壓力管道及輸送管道進(jìn)入瓶蓋插塞,對(duì)于亞磷酰胺,1—8號(hào)瓶其壓力管道也作為排氣管。氬氣管要保持在液體水平以上,而輸送管卻伸到瓶的底部。當(dāng)閥門正確設(shè)置打開時(shí),儲(chǔ)液瓶上部空間由氬氣加壓,液體被推進(jìn)輸送管,流到其目的地。
(四)亞磷酰胺瓶排氣
除了加壓外,亞磷酰胺瓶都是用壓力排氣管排氣的。把亞磷酰胺放人儀器前,要用氬氣排除空氣使其凈化。凈化是通過輸送管輸送氣體,當(dāng)氣體輸送到瓶內(nèi)時(shí),空氣經(jīng)壓力排氣管排出。這是由瓶子更換步驟自動(dòng)完成的。廢液瓶是輸送系統(tǒng)的低壓側(cè),必須將出口與大氣相通。要確保排氣管通到通風(fēng)柜。如果排氣管阻塞,將會(huì)產(chǎn)生反壓,試劑和溶劑的輸送會(huì)受到抑制。
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