細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解答（三）
18. 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的*適PH值和滲透壓是多少？
生長(zhǎng)培養(yǎng)基的PH值對(duì)細(xì)胞的增值和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會(huì)產(chǎn)生影響。對(duì)于大部分鱗翅類昆蟲細(xì)胞系，在PH值 6.0－6.4范圍的大部分應(yīng)用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細(xì)胞系時(shí)，培養(yǎng)基的*適滲透壓是 345－380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細(xì)胞培養(yǎng)方式，減少技術(shù)問題，保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。19. High Five細(xì)胞有任何其它名稱嗎？
High Five細(xì)胞也被稱為Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。
20.在High Five無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少？
High Five無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。
21.High Five細(xì)胞用多大的密度凍存？
3.0x10E6 cells/ml
22.在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對(duì)我的細(xì)胞有害嗎？
可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復(fù)合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以溶解，對(duì)實(shí)驗(yàn)不會(huì)有不利的影響。
23.如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞？能用胰蛋白酶消化嗎？
我們強(qiáng)力推薦使用脫落細(xì)胞的方法，因?yàn)檫@項(xiàng)技術(shù)破壞性*小，生活力*高。通過使用巴氏德吸液管，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動(dòng)。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在**必要的情況下，才使用胰酶消化細(xì)胞。
胰酶消化一個(gè)T25瓶的sf9細(xì)胞：
1)去除培養(yǎng)基。
2) 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞，去除PBS.
3) 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面）。
4) 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測(cè)看到5分鐘后它們正在向上移動(dòng)。
5) 向細(xì)胞中加入2ml 細(xì)胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。）
6) 離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞。去除培養(yǎng)基。
7) 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。傳代。
24.在Sf9, Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，肝素的使用量是多少？
為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液。
25.如何評(píng)估ES細(xì)胞合格的胎牛血清？
使用D3 ES細(xì)胞。這是一個(gè)對(duì)于胎牛血清中生長(zhǎng)促進(jìn)、生長(zhǎng)抑制和分化因子非常敏感的細(xì)胞系。
相關(guān)生長(zhǎng)效率分析：
當(dāng)ES細(xì)胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，檢測(cè)開始和支持ES細(xì)胞克隆的能力。
細(xì)胞毒分析：
當(dāng)以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，檢測(cè)ES細(xì)胞和feeder細(xì)胞的生長(zhǎng)能力。
相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析：
檢測(cè)胎牛血清支持未分化ES細(xì)胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評(píng)估分化程度。未分化的ES細(xì)胞小顏色深紅粉紅，分化的細(xì)胞較大，豐滿，顏色較淺。
所有的分析在沒有ESGRO的情況下進(jìn)行的，培養(yǎng)基中出現(xiàn)ESGRO會(huì)掩蓋由胎牛血清所導(dǎo)致的問題。（ESGRO或LIF經(jīng)常用來保持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài)。）
經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，大約8批中有1批可以用來培養(yǎng)ES細(xì)胞。
26.在重新凍存sf9細(xì)胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會(huì)降低嗎？
通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后，應(yīng)該返回凍存。無論什么時(shí)候記數(shù)時(shí)，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力。如果超過95％的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時(shí)左右加倍，細(xì)胞仍然可以使用。如果活力和加倍時(shí)間下降，它們的感染力將不在是有效的。
注：以上資料均來自網(wǎng)絡(luò)，僅供參考。