共聚焦顯微鏡在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡(BeamSplitter),將已經(jīng)通過透鏡的反射光折向其它方向,在其焦點上有一個帶有針孔(Pinhole)的擋板,小孔就位于焦點處,擋板后面是一個光電倍增管(photomultipliertube,PMT)??梢韵胂?,探測光焦點前后的反射光通過這一套共焦系統(tǒng),必不能聚焦到小孔上,會被擋板擋住。于是光度計測量的就是焦點處的反射光強度。
傳統(tǒng)的光學顯微鏡使用的是場光源, 標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的 衍射或 散射光的干擾;激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明 針孔形成 點光源對標本內(nèi) 焦平面的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處 成像,由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機 監(jiān)視器屏幕上形成 熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于 物鏡 焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處 成像,這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
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