實驗流程--ELISA 
間接ELISA         
 
 
1．溶液準(zhǔn)備：   包被液：50mM Na2CO3 ( pH9.6 ), 20mMTris-HCl ( pH8.5 ) 或10mM PBS ( pH7.2 )
封閉液：一般封閉用BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠等
洗滌液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸鹽緩沖液或者Tris鹽緩沖液 ( pH7.4 )
　　
 
 
2．實驗程序：
　　1  ) 將抗原按適當(dāng)濃度溶解于包被液中。
　　2  ) 在對應(yīng)的孔中加入100μl抗原，室溫孵育2h或4℃過夜。
　　3  ) 倒空液體并拍干殘留液體，用300μl洗滌液清洗兩次。
　　4  ) 每個孔中加300μl封閉液，孵育1h。
　　5  ) 倒空液體并拍干殘留液體，用300μl洗滌液清洗兩次。
　　6  ) 每個孔中加100μl一抗，37℃孵育1h或室溫孵育3h。
　　7  ) 倒空液體并拍干殘留液體，每個孔中加滿洗滌液，倒空液體并拍干殘留液體，重復(fù)3次。
　　8  ) 每個孔中加100μl二抗，室溫孵育1h。
　　9  ) 倒空液體并拍干殘留液體，每個孔中加滿洗滌液，倒空液體并拍干殘留液體，重復(fù)3次。
　　10 ) 用洗滌液浸泡5min，拍干殘留液體，這次的洗滌步驟對于減少背景信號是很重要的。
　　11 ) 每個孔中加滿洗滌液，倒空液體并拍干殘留液體，重復(fù)5次。
　　12 ) 每個孔中加100μl底物，顯色30min并立即在405-410nm讀數(shù)。
 
夾心ELISA        
 
 
1． 溶液準(zhǔn)備：
  包被液：50mM Na2CO3 ( pH9.6 ), 20mMTris-HCl ( pH8.5 ) 或10mM PBS ( pH7.2 )
封閉液：一般封閉用BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠等
洗滌液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸鹽緩沖液或者Tris鹽緩沖液 ( pH7.4 )
AKP偶聯(lián)的鏈球菌親和素溶液：用1×封閉液稀釋酶偶聯(lián)物
 
 
2． 實驗程序：
　　1  ) 將捕獲抗體包被液稀釋至相應(yīng)的濃度。
　　2  ) 在對應(yīng)的孔中加入100μl抗體溶解液，室溫孵育2h或4℃過夜。
　　3  ) 倒空液體并拍干殘留液體，用300μl洗滌液清洗兩次。
　　4  ) 每個孔中加300μl封閉液，孵育1h。
　　5  ) 倒空液體并拍干殘留液體，用300μl洗脫液清洗兩次。
　　6  ) 每個孔中加100μl生物素標(biāo)記的檢測抗體，37℃孵育1h或室溫孵育3h。
　　7  ) 倒空液體并拍干殘留液體，每個孔中加滿洗滌液，倒空液體并拍干殘留液體，重復(fù)3次。
　　8  ) 每個孔中加100μl AKP偶聯(lián)的鏈球菌親和素，室溫孵育1h。
　　9  ) 倒空液體并拍干殘留液體，每個孔中加滿洗脫液，倒空液體并拍干殘留液體，重復(fù)3次。
　　10 ) 用洗滌液浸泡5min，拍干殘留液體，這一步對于減少背景信號是很重要的。
　　11 ) 每個孔中加滿洗滌液，倒空液體并拍干殘留液體，重復(fù)5次。
　　12 ) 每個孔中加100μl底物，顯色30min并立即在405-410nm讀數(shù)。
 

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