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技術(shù)文章

花生粕和豆粕用定氮儀測定粗蛋白含量的方法



用上海沛歐定氮儀怎樣測定花生粕和豆粕用定氮儀測定粗蛋白含量？

      用于測定有機(jī)物的含氮量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質(zhì)的含量。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉(zhuǎn)變成氨，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是，這個反應(yīng)進(jìn)行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)液的沸點(diǎn)，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結(jié)合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)鹽酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量可計(jì)算出待測物中的總氮量。蛋白質(zhì)的含氮量為16%，即1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。

1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 器材   上海沛歐SKD-100定氮儀 、消化爐SKD-08S2    1.2 試劑2 實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)材料
器材
上海沛歐凱氏定氮儀 1套（SKD-08S2消化爐可以任意選擇消化孔數(shù)，而不影響熱量散失）；
300ml凱氏燒瓶 4個；
移液管；錐形瓶；
試管；
小玻璃珠
試劑
98%濃硫酸分析純；
35％氫氧化鈉溶液；
2％硼酸溶液；
標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01mol／L)。
粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物 ：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml 0.1％甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml 0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。
樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。
實(shí)驗(yàn)步驟
安裝凱氏定氮儀。
       消化：取4個300ml凱氏燒瓶并標(biāo)號,各加1顆玻璃珠，在1號及2號瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200 mg，濃硫酸5 ml。注意加樣品時應(yīng)直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化。在消化開始時應(yīng)控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。（上海沛歐SKD-08S2消化爐可編程設(shè)定消化爐消化樣品的升溫曲線）
蒸餾：
      蒸餾器的洗滌：用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀，在蒸汽發(fā)生器中加入用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑，用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后，在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶，繼續(xù)蒸汽洗滌2分鐘，觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色，如不變色則證明蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。移走錐形瓶，停止加熱，打開夾子。（沛歐skd-100可以設(shè)定清洗程序）
蒸餾：設(shè)定取30％的氫氧化鈉溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸餾水約5ml稀釋液，設(shè)定蒸餾時間5分鐘，開始蒸餾。氨氣進(jìn)入錐形瓶，瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續(xù)下一個蒸餾操作。待樣品和對照均蒸餾完畢后，同時進(jìn)行滴定。
滴定：用0.01mol／L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點(diǎn)。
結(jié)果計(jì)算：

其中：

A為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)；

B為滴定對照液用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)；

C為所取樣品溶液的ml數(shù)。

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