Determination of Forsythin content in Shexiang Jiegu Jiaonangby HPLC

　　【Abstract】 OBJECTIVE:To set up a method for quality control ofShexiang Jiegu Jiaonang METHOD HPLC method was developed toquantitative determination. COLUMN Agilent Technologies ZORBAXExtend-C18  4.6×250mm, 5μm.The mobilic phase wasacetonifrile-water (21:79V/V).The column temperature was 30℃,thewavelength for detection was 203nm,flow rate was 1.0ml·min-1.RESULTS  The paeonol average of recovery rate was 97.6%, andRSD was 1.0%(n=6). CONCLUSION  The method is simple, accurateand suitable for its assaying.

　　【Key word】 HPLC; Shexiang Jiegu Jiaonang; Notoginsenoside R1;determination

　　麝香接骨膠囊為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》第五冊（中藥成方制劑）收載的品種，由赤芍、三七、當(dāng)歸、續(xù)斷、蘇木、麝香等22味中藥組成，具有散瘀止痛，續(xù)筋接骨之功效。臨床用于跌打損傷，筋傷骨折，瘀血凝結(jié)，閃腰岔氣[1]。**中三七為主藥之一，三七皂苷R1為其主要有效成分，原標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定方法。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測定麝香接骨膠囊中三七皂苷R1的含量，以期為該制劑的質(zhì)量提供快速、準(zhǔn)確的測定方法，現(xiàn)報告如下。

　　1  儀器與試藥

　　LC－2010A 高效液相色譜儀，CLASS－VP色譜工作站，紫外檢測器；三七皂苷R1對照品（批號：110745-200312），由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用；麝香接骨膠囊為市售樣品（遼源市亞東中藥有限責(zé)任公司，規(guī)格0.3g·粒-1，批號：060801，061102，060912）。乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

　　2  方法與結(jié)果

　　2.1  色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗
色譜柱：Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm,5μm；流動相：乙腈-水（21：79，V/V）；檢測波長：203nm；流速：1.0ml·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計應(yīng)不低于4000。

　　2.2  溶液制備

　　2.2.1  對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12小時以上的三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成0.25mg·ml-1的對照品貯備液；再精密量取對照品貯備液適量，加甲醇制成0.05mg·ml-1的對照品溶液，即得。

　　2.2.2  供試品溶液的制備取裝量差異項下的麝香接骨膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）1小時，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加水飽和的正丁醇30ml使溶解，加氨試液振搖提取3次，每次15ml，合并氨試液提取液，再用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次15ml，與上述正丁醇液合并，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移置10ml量瓶中，加甲醇稀釋置刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，取續(xù)濾液，即得[2]。

　　2.2.3  陰性對照溶液的制備

　　取除三七皂苷R1以外的**中其余藥材的十分之一量，按法制成膠囊，再按供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液。

　　2.3  專屬性試驗

　　分別精密吸取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時間（三七皂苷R110.971min）的色譜峰，陰性試驗無干擾，證明本法可行。

2.4  線性關(guān)系考察

　　精密吸取三七皂苷R1對照品貯備液（濃度：0.25mg.ml-1）適量，加甲醇配成濃度分別為0.005、0.01、0.05、0.10、0.15、0.25mg·ml-1的溶液6份，搖勻，用0.22μm微孔濾膜過濾。精密吸取續(xù)濾液各10μl，注入液相色譜儀，測得峰面積。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，其濃度（C）為橫坐標(biāo)，得三七皂苷R1的回歸方程為：A=392250.2C +8620.1，r=0.9998（n=6）。結(jié)果表明，三七皂苷R1在0.005～0.25mg·ml-1范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系。

　　2.5  精密度試驗

　　精密吸取三七皂苷R1對照品溶液（0.05mg·ml-1）10μl，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，求得三七皂苷R1溶液峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.3%（n=6），表明精密度較好。

　　2.6 穩(wěn)定性試驗

　　精密吸取三七皂苷R1對照品溶液（0.05mg·ml-1）10μl，在0、4、8、12、24、48h分別進(jìn)行測定，結(jié)果表明三七皂苷R1對照品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.4%（n=6）。

　　2.7  重復(fù)性試驗

　　取供試品（批號061101），共6份，分別按“2.2.2供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進(jìn)行測定，求得三七皂苷R1含量的RSD為1.6%（n=6），表明重現(xiàn)性較好。

　　2.8  加樣回收率試驗

　　精密稱取已知含量的樣品（批號061101，三七皂苷R1含量0.93mg·g-1，平均裝量0.2996g·粒-1）適量，共6份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入三七皂苷R1對照品貯備液（0.25mg·ml-1）各3ml，按“2.2.2供試品溶液的制備”方法操作，得回收率試驗溶液，依法測定，結(jié)果見表1。表1 三七皂苷R1加樣回收率試驗（略）

　　2.9  樣品含量測定

　　分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定三批樣品中三七皂苷R1峰面積，按外標(biāo)法計算其含量（n=5），結(jié)果見表2。表2 3批樣品含量測定結(jié)果（略）   

　　3  討論

　　3.1 通過對3批樣品中三七皂苷R1的測定，結(jié)果表明*高含量為0.31mg·粒－1，*低為0.27mg·粒－1，綜合考慮確定限量每粒含三七皂苷R1不得低于0.20mg。

　　3.2  流動相的選擇 試驗中采用不同的流動相甲醇-水（25︰75），乙腈-水-冰醋酸（25︰75︰0.5），結(jié)果表明采用流動相乙腈-水（21︰79）的色譜圖基線較穩(wěn)。

　　3.3  本方法結(jié)果準(zhǔn)確，方法簡便，重現(xiàn)性及回收率均理想，可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。