1、對于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流動相。甲醇/水作流動相時，如果得到的色譜圖出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出的峰太靠后而分離效果又不錯，可加大甲醇的比例，可使出峰變早。對于一些難分離的物質(zhì)，要選用乙腈/水作流動相。

2、秘訣1:由強到弱： 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗， 這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。

秘訣2: 三倍規(guī)則 ：每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。

秘訣3: 粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當分離達到一定程度，應將有機溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。

3、含緩沖鹽的流動相*好當天用完，不要留置過夜，用不完也要倒掉，這是為了保護好機子起見，流動相的保存期限與緩沖鹽的濃度有關(guān)系，越濃越不宜保留，總之，我認為緩沖鹽溶液都不宜保留超過24小時，HPLC用緩沖鹽時,由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細小鹽粒非常堅硬,它附著在藍寶石活塞桿上,隨著藍寶石活塞桿的往復運動,容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。