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技術(shù)文章

黃曲霉**及其檢測方法綜合介紹
一、黃曲霉**介紹
黃曲霉**(aflatoxin，簡稱為 AF)是到目前為止所發(fā)現(xiàn)的毒性大的****。它可通過多種途徑污染食品和飼料，直接或間接進(jìn)入人類食物鏈，威脅人類健康和生命**，對人體及動物內(nèi)臟器官尤其是肝臟損害嚴(yán)重，該**是黃曲霉和寄生曲霉中產(chǎn)毒菌株的代謝產(chǎn)物，普遍存在于霉變的糧食及糧食制品中。黃曲霉**十分耐熱，加熱至 230℃才能被完全破壞，因此一般烹飪加工也不易消除。 
二、黃曲霉**對人體的危害 
1、 引起急、慢性中毒： 
黃曲霉**是劇毒物質(zhì)，其毒性相當(dāng)于***的 10 倍，砒霜的 68 倍。黃曲霉**屬肝臟毒，除抑制 DNA、RNA的合成外，也抑制肝臟蛋白質(zhì)的合成，黃曲霉毒索引起人類的急性中毒事件，外均有許多報導(dǎo)，典型的是印度的霉變玉米事件，該事件直接導(dǎo)致了數(shù)十人喪生，數(shù)百人患上不同類型的肝臟**。 
2、 致*性： 
黃曲霉**有極強(qiáng)的致*性，長期攝入黃曲霉**會誘發(fā)肝*。它誘發(fā)肝*的能力比二甲基亞硝胺大 75 倍，是目前公認(rèn)的致*性強(qiáng)的物質(zhì)之一。另據(jù)世界衛(wèi)生組織報導(dǎo)，黃曲霉**含量在30—50ug/kg 時為低毒，50—100ug/kg 時為中毒，100—1000ug/kg 時為高毒，1000ug/kg 以上為極毒。鑒于黃曲霉**對人類的巨大危害性，我國對其在食品中的含量作了嚴(yán)格規(guī)定，其中，乳制品中黃曲霉**高允許量為 5ug/kg（即 5ppb）。 
三、黃曲霉**的種類 
黃曲霉**主要有 4 種：即B1、B2、C1、G2，其中B1 被認(rèn)為是主要的有毒物質(zhì)，有 2 種這些**的代謝產(chǎn)物M1 和M2。其中黃曲霉**B1 主要存在于農(nóng)產(chǎn)品，動物飼料，中藥等產(chǎn)品中；黃曲霉**M1是動物攝入黃曲霉**B1后在體內(nèi)經(jīng)羥基化代謝的產(chǎn)物，一部分從尿和乳汁排出，一部分存在于動物的可食部分，如乳、肝、蛋類、腎、血和肌肉中，其中以乳為常見。黃曲霉**M1的毒性和致*性與黃曲霉**B1的基本相似。由于牛乳及其制品是人類、特別是嬰兒的主要食品，所以其危害性更大。 
四、新政策及國標(biāo)（含國外一些政策） 
1、 自 2003 年8月 1 日起，凡在我國境內(nèi)從事米、面、油、醬油、醋生產(chǎn)加工的企業(yè)，其產(chǎn)品須經(jīng)檢驗(yàn)合格后方可上市。國家質(zhì)檢總局發(fā)布的《關(guān)于印發(fā)小麥粉等 5 類食品生產(chǎn)許可證實(shí)施細(xì)則的通知》中明確規(guī)定，黃曲霉** B1 必須檢測。 
2、 在第八期《中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局公報》中發(fā)布關(guān)于黃曲霉**檢測方法的新國標(biāo)： 
（1）、GB/T 18979-2003  《食品中黃曲霉**的測定——**親和層凈化高效液相色譜法和熒光光度法》 
（2）、GB/T 18980-2003  《乳和乳粉中黃曲霉** M1 的測定——**親和層凈化高效液相色譜法和熒光光度法》 
以上兩項(xiàng)國標(biāo)均在 2003年 8 月1 日開始實(shí)施 
3、2002 年 2 月 4 日歐盟決議對從中國進(jìn)口或委托從中國進(jìn)口的花生和花生制品實(shí)施黃曲霉**強(qiáng)制性檢測的特殊條件
五、中國及國際上對黃曲霉**的檢測標(biāo)準(zhǔn) 
1、主要國家：
品名
中國標(biāo)準(zhǔn)
美國標(biāo)準(zhǔn)
歐盟
玉米、花生、花生油，堅果和干果（核桃、
杏仁）
≤20μg/kg
≤20μg/kg
≤2、4、5、8、10、15μg/kg
玉米及花生仁制品（按原料折算
≤20μg/kg
≤20μg/kg
≤2、4、5、8、
10、15μg/kg
大米、其它食用油（香油、菜子油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油）
≤10 μg/kg
≤10μg/kg
≤ 2 、4 μg/kg
其它糧食（麥類、面粉、薯干）、發(fā)酵食品（醬油、食用醋、豆豉、腐乳制品）、淀粉類制品（糕點(diǎn)、餅干、面包、裱花蛋糕）
≤ 5 μg/kg
(ppb)
≤10μg/kg (ppb)
不得檢出
牛乳及其制品（**牛乳、新鮮生牛乳、全脂牛奶粉、淡煉乳、甜煉乳、奶油）、黃油、新鮮豬組織（肝、腎、血、瘦肉）
≤0.5μg/kg
(ppb)
≤0.5μg/kg
(ppb)
≤0.05μg/kg
(ppb)
2、其他 
(1)、WHO／FAO 標(biāo)準(zhǔn)。國際衛(wèi)生組織(WHO)／世界糧農(nóng)組織所屬的食品法典委員會(CAC)推薦食品、飼料中黃曲霉**大允許量標(biāo)準(zhǔn)為總量(B1+B2+G1+G2)小于15μg／kg；牛奶中M1 的大允許量為 0．5μg／kg 
(2)、南非標(biāo)準(zhǔn)。1990 頒布了黃曲霉**的大允許標(biāo)準(zhǔn)：食品中黃曲霉**總量小于 10μg／kg，其中黃曲霉** B1 小于5μg／kg。 
(3)、其他標(biāo)準(zhǔn)。印度標(biāo)準(zhǔn)是花生中黃曲霉** B1 小于 30μg／kg；越南和阿根廷的標(biāo)準(zhǔn)為黃曲霉** B1 小于20μg／kg。  
六、黃曲霉**檢測方法 
測定黃曲霉**M1的方法有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯(lián)**吸附測定法、質(zhì)譜法、放射**測定法。這些方法或多或少都具有如下不足之處： 
（1）、在操作過程中，需要使用劇毒的黃曲霉**M1作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物，對操作人員造成巨大的沾污危險，而且黃曲霉**M1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購買十分困難。 
（2）、操作過程煩瑣、復(fù)雜、時間長，勞動強(qiáng)度大。 
（3）、儀器設(shè)備昂貴、笨重、操作復(fù)雜，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速分析。 
（4）、靈敏度較差，重復(fù)性很難得到滿意結(jié)果。 
在上面第四項(xiàng)中提到的新國標(biāo)方法“**親和柱法”較好的解決了上面的不足，該種方法可以采用配套的熒光儀進(jìn)行檢測，也可以和高效液相色譜法結(jié)合，解決標(biāo)準(zhǔn)物污染和操作過程繁復(fù)等問題。同時該種方法有著較好的權(quán)威性和通用性，且為國外多個組織認(rèn)可，被列為標(biāo)準(zhǔn)方法，如： 
美國公職分析化學(xué)家協(xié)會（AOAC） 
美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦谷物檢測中心（FGIS） 
國際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會（IUPAC） 
美國食品藥品行政署（US-FDA） 
美國農(nóng)業(yè)部（USDA） 
同時在被認(rèn)證的機(jī)構(gòu)： 
中國出入境檢驗(yàn)檢疫局（CIQ）
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)（GB） 
七、黃曲霉**檢測——“**親和柱法”方法簡介
為了開發(fā)一種簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的分析方法,美國 VICAM(維康)公司與哈佛大學(xué)、麻省理工學(xué)院、約翰－霍普金斯大學(xué)、AOAC、FDA、FGIS、美國農(nóng)業(yè)部等大學(xué)和政府機(jī)構(gòu)通力合作，發(fā)明研制了一系列以單克隆**親和柱為分離手段，用熒光計、紫外燈作為檢測工具的分析方法。
該項(xiàng)技術(shù)有一下特點(diǎn)： 
1、 認(rèn)證機(jī)構(gòu)廣泛，通用性強(qiáng)（見第六項(xiàng)） 
2、 分析速度快，一個樣品只需 10－15分鐘，其他傳統(tǒng)的方法要做到定量分析需要幾小時至幾天的時間。 
3、 靈敏度高，測定范圍廣泛（0－300ppb）,用熒光計可以測定 0.1ppb 的黃曲霉** M1，用 HPLC可以檢測出 10ppt 的黃曲霉** M1。 
4、 采用單克隆**技術(shù)，可以特效性地將黃曲霉**和其他****分離出來，分離效率和回收率高，正確性和可靠性強(qiáng)。 
5、 儀器輕便容易攜帶，自動化程度高，操作簡單，直接讀出測試結(jié)果，對實(shí)驗(yàn)操作人員要求不高，可以在小型實(shí)驗(yàn)場所使用。 
6、 不需要劇毒的黃曲霉**和其他****標(biāo)準(zhǔn)物來標(biāo)定，所以在整個實(shí)驗(yàn)過程中，**可靠。 目前，美國花生農(nóng)場主、加工廠、官方檢測機(jī)構(gòu) 90%以上均采用維康技術(shù)分析黃曲霉**，維康技術(shù)在全世界 110 個國家和地區(qū)得到了廣泛的應(yīng)用。 

可以檢測的樣品包括：大米、面粉、醬油、植物油、醋、牛奶、奶制品、花生、花生醬、花生油、核桃、胡桃、杏仁、咖啡、玉米、蜂蜜、谷物、高粱、大豆、醬、蔬菜、胡椒、辣椒、中藥材、**、啤酒、小麥、棉籽、燕麥、飼料等。 
八、可以測試的其他**** 
該種方法適用廣泛，利用同一臺儀器和相似的分析方法還可檢測出赭曲霉**，伏馬**、玉米赤霉烯酮、嘔吐**、T-2 **及橘青霉**等。
快速、準(zhǔn)確的檢測食品中的****
黃曲霉****親和柱分析法(IAC-AFLATEST)是美國維康(Vicam)公司的技術(shù),1994 年被AOAC(美國公職分析化學(xué)家協(xié)會)  批準(zhǔn)為新的官方方法(編號為：991.31)，同時，它也是美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦谷物檢測中心(證書編號為：FGIS91-103-13),IUPAC(國際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會)US-FDA(美國食品藥品行政署)和 USDA(美國農(nóng)業(yè)部)認(rèn)證的官方方法.經(jīng)山東商檢局科技工作者的努力,黃曲霉****親和柱分析法(IAC-AFLATEST)已經(jīng)被制定為中國出入境檢驗(yàn)檢疫局(CIQ)新的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。 
以前，黃曲霉**分析一般采用薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)和酶聯(lián)吸附**法(ELISA)。TLC 雖然簡便，但靈敏度差；HPLC 雖然靈敏度高，但樣品處理煩瑣，操作復(fù)雜，儀器昂貴.ELISA 重復(fù)性差試劑壽命短需要低溫保存。此外，這些方法都有共同的不足之處： 
（1）  在操作過程中，需要使用劇毒的****作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物，有對操作人員造成巨大沾污的危險。 
（2）  在對樣品進(jìn)行預(yù)處理過程中，需要使用多種有毒、異味的有機(jī)溶劑，不僅毒害操作人員，而且污染環(huán)境。 
（3）  操作過程煩瑣、時間長，勞動強(qiáng)度大。 
（4）  儀器設(shè)備復(fù)雜、笨重，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速分析。 
（5）  靈敏度較差，無法滿足歐盟等國的標(biāo)準(zhǔn)要求。 
為了開發(fā)一種簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的分析方法,美國維康(Vicam)公司與哈佛大學(xué)、麻省理工、約瀚-霍普金斯大學(xué)、AOACFDA、FGIS、美國農(nóng)業(yè)部等大學(xué)和政府機(jī)構(gòu)通力合作，研制發(fā)明了一系列的以單克隆**親合柱為分離手段,用熒光計,紫外燈作為檢測工具的分析方法.維康技術(shù)具有如下特點(diǎn): 
1)  是 AOAC(美國職業(yè)分析家協(xié)會)、IUPAC(國際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會)、USDA-FGIS(美國農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦物谷檢測中心)、USDA-GIPSA(美國農(nóng)業(yè)部谷物檢測、包裝、貯存行政署)認(rèn)證的官方方法，其檢測結(jié)果在世界各地均能得以認(rèn)可。 
2)  分析速度快，一個樣品只需 10-15 分鐘，而其它傳統(tǒng)方法均需要幾個小時至幾天時間。 
3)  靈敏度高，測定范圍寬(0.1-300ppb)，用 HPLC 檢測可以測定 10ppt 的黃曲霉** M1。 
4)  采用單克隆抗體**技術(shù),可以特效性地將黃曲霉**或其它****分離出來,分離效率和回收率高,正確性和可靠性強(qiáng)。 
5)  儀器設(shè)備輕便容易攜帶,自動化程度高,操作簡單,直接讀出測試結(jié)果,高中文化水平者即可勝任,可以在小型實(shí)驗(yàn)室或現(xiàn)場使用 
6)  不需要劇毒的黃曲霉**及其它****標(biāo)準(zhǔn)物來標(biāo)定,所以整個試驗(yàn)操作過程中,**可靠。 
7)  利用同一臺儀器和相似的分析方法，還可以檢測赭曲**、伏馬**、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON 或稱嘔吐**）、T-2 **和橘青霉**。

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