超微量核酸分析儀的比色法

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于超微量核酸分析儀的比色法:

BCA、Lowry、Bradford都是通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法。比色法檢測蛋白濃度時必須構建一個標準曲線，因此將這三種測量蛋白的方法集合在比色法中。

BCA是一種通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法，它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測以及那些含有在紫外區(qū)域有光吸收的雜質的蛋白的濃度檢測。BCA法是檢測Cu+1離子的方法，在堿性環(huán)境下，Cu＋2離子會被蛋白還原為Cu+1離子。兩個聯(lián)喹啉二羧酸BCA分子和一個 Cu+1離子形成紫色的螯合物這樣在有蛋白存在情況下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有大光吸收，以750nm光系數(shù)為標準化。

商業(yè)化的BCA試劑盒有兩種蛋白檢測范圍：

常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1，這個試劑盒檢測范圍從0.20mg/到8.0mg/ml（BSA）。當使用基座檢測時，推薦使用4ul 樣品和80ulBCA試劑。

微量檢測使用1：1試劑/樣品，可以檢測蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/m要準備足夠的樣品來做基座檢測，建議使用10ul樣品和10ulBCA試劑（使用P管）。

按照試劑盒廠家建議的操作來構建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程使用相同的時間和溫度。

    注意：如果試驗溫度高于60度，好使用2倍的試驗體積，避免揮發(fā)導致樣品減少，從而影響測試結果。

Lowry法蛋白定量是一個應用非常廣泛的蛋白定量方法。Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應形成銅-蛋白復合物。Folin－Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復合物，產(chǎn)生與蛋白量成比例的藍色產(chǎn)物，可以在650nm檢測，405nm處校準。試驗中使用的試劑可以從多個廠家購買。

要準確準備標準品，推薦使用20ul的蛋白樣品和100ul的Lowry試劑來做反應。在本儀器上可以檢測的樣品濃度范圍是從0.20mg/ml到4mg/ml。按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準備標準品和樣品。在所有操作過程中要保持每個樣品處理時間和環(huán)境溫度一致。由于本儀器基座檢測的濃度范圍比常規(guī)檢測更大，在構建標準曲線時需要構建比廠家建議更寬的標準曲線范圍。檢測需要的樣品量推薦使用2ul。

Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測。Bradford法是根據(jù)蛋白能夠使考馬斯亮藍嘗試吸收位移來檢測蛋白濃度的，一般在595nm處檢測吸光度。蛋白-染料復合物在595nm處檢測并在750nm處做標準化?？梢詮亩鄠€廠家購買相應的試劑盒。

商業(yè)化的 Bradford 試劑盒有兩種蛋白檢測范圍：

常規(guī)檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1，這個試劑盒檢測范圍從0.10mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。佳線形范圍在0.01-1mg/ml。當使用基座檢測時，推薦使用4ul 樣品和200ul Bradford 試劑。

微量檢測使用1：1 試劑/樣品，可以檢測蛋白濃度范圍從15ug/ml 至125ug/ml。要準備足夠的樣品來做基座檢測，建議使用10ul 樣品和10ulBCA 試劑（使用PCR管）。按照試劑盒廠家建議的操作來構建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程中使用相同的時間和溫度。

    注意：如果試驗溫度高于60度，好使用2倍的試驗體積，避免揮發(fā)導致樣品減少，從而影響測試結果。    

在Bradford試劑盒中同樣包括用于構建標準曲線的標準品。由于本儀器能夠檢測比常規(guī)比色皿檢測更高的濃度，用戶需要使用比廠家推薦的標準品更高的濃度。

5.2 比色法檢測

注意：比色法檢測進行樣品檢測前，需要建立標準曲線！

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于超微量核酸分析儀的比色法。

我們上海金鵬分析儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超微量核酸蛋白測定儀、化學發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、蛋白質分離純化系統(tǒng)、光化學反應儀、旋渦混合器、恒流泵、自動部分收集器等十幾個系列產(chǎn)品的廠家，歡迎大家前來訂購