小鼠脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞
細(xì)胞簡介：
脈絡(luò)膜新生血管 (choroidal
neovascularization，CNV)已成為眼科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點之一，在血管外側(cè)有結(jié)締組織，結(jié)締組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成，起到支持和保護(hù)作用。
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組織來源
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產(chǎn)品規(guī)格
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貨號
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用途
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眼組織
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5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
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A01X1977
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僅供科研研究實驗
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細(xì)胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代 成纖維 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時間根據(jù)正常細(xì)胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細(xì)胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。
根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。
實驗方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松??，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
公司正在出售的產(chǎn)品：
HGFELISAkit
過氧化氫酶elisa分析檢測試劑盒
Camel catalase ELISA
kit
人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)elisa分析檢測試劑盒
HumanHIF-1αELISAKit
組織VEGFR2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體（sEPCR）elisa檢測試劑盒
大鼠己糖激酶(HK)elisa檢測試劑盒
豬肝炎病毒細(xì)胞的受體1/腎損傷分子1/KIM1(HAVCR1)elisa檢測試劑盒
IL-2誘導(dǎo)型T細(xì)胞激酶抗體
ITK
脂肪細(xì)胞膜相關(guān)蛋白抗體
APMAP
DAPI染色液 50ml
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)elisa檢測試劑盒
貓雌二醇(E2)elisa檢測試劑盒
石蠟切片摩羅利（MALLORY/PERLS）鐵（三價）染色試劑盒
Ras樣蛋白A+B抗體
RALA+RALB
著絲粒蛋白Q抗體
CENPQ
泛素特異性蛋白酶9X抗體 Anti-USP9X
蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B抗體 Anti-PPP2R1B
原鈣粘附蛋白17抗體 Anti-PCDH17
14-3-3τ蛋白抗體 Anti-14-3-3
Tau
PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗兔IgG H&L
小鼠脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞Rabbit Anti-Horse IgG H&L / AP
神經(jīng)特異性蛋白2抗體
Mpp alpha; PP2C
alpha; PP2C-alpha; PPM 1A; PPM1A; PPM1A_HUMAN; PPPM1A; Protein phosphatase 1A
(formerly 2C) magnesium dependent alpha isoform; Protein phosphatase 1A;
Protein phosphatase 1A magnesium dependent alpha; Protein phosphatase 2C alpha;
Protein phosphatase 2C alpha isoform; Protein phosphatase 2C isoform alpha;
Protein phosphatase IA; Protein phosphatase 2C isoform alpha; IA antibody.
小鼠脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞
大鼠膀胱上皮細(xì)胞
GP2d人結(jié)腸癌細(xì)胞
人Ph+急淋白血病細(xì)胞系;SUP-b15
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