培養(yǎng)方法與步驟：
①動(dòng)物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時(shí)間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí)，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞，這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
人胃癌相關(guān)成纖維細(xì)胞
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產(chǎn)品名稱
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人胃癌相關(guān)成纖維細(xì)胞
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產(chǎn)品規(guī)格
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5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
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組織來源
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手術(shù)胃癌組織
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生長特性
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貼壁培養(yǎng)
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細(xì)胞形態(tài)
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長梭形
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分類
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人原代細(xì)胞
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貨號(hào)
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A01X1316
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用途
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僅供科研實(shí)驗(yàn)
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細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于人手術(shù)胃癌組織。
2）細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細(xì)胞生長方式：長梭形，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡介：
癌組織由實(shí)質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細(xì)胞構(gòu)成癌實(shí)質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實(shí)質(zhì)的作用，不具有特異性。
當(dāng)實(shí)體瘤超過 1-2mm時(shí)，需要通過新生的血管和活化的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞來獲取癌細(xì)胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞可通過分泌多種細(xì)胞因子和生長因子來發(fā)揮促進(jìn)癌血管**的作用。
上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也能觀察到相似的EMT過程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直
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基質(zhì)金屬蛋白酶11抗體
MMP11
雙特異性磷酸酶抗體21抗體
DUSP21
肉蛋白1抗體 Anti-TMEFF2
環(huán)指蛋白111抗體 Anti-RNF111
核分布基因E源蛋白1抗體 Anti-NDE1
視神經(jīng)視網(wǎng)膜相關(guān)蛋白VAX2抗體 Anti-VAX2
Cy7標(biāo)記的兔抗人IgA
人胃癌相關(guān)成纖維細(xì)胞Rabbit Anti-Mink IgG H&L / PE-Cy7
GLP1類似蛋白Exendin4抗體
PMF1_HUMAN;
Polyamine-modulated factor 1; PMF-1; Polyamine-modulated factor 1.
人胃癌相關(guān)成纖維細(xì)胞
人黑色素細(xì)胞
熒光素酶標(biāo)記的人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞;ACHN-Luc
panc02小鼠胰腺癌細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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