實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
大鼠椎體終板軟骨細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
軟骨細(xì)胞存在于關(guān)節(jié)軟骨中，負(fù)責(zé)分泌 II型膠原和其它類型的膠原以及非膠原的細(xì)胞外基質(zhì)大分子。成軟骨細(xì)胞的增殖和分化與脊椎動(dòng)物骨架的發(fā)育有著密切的關(guān)系。軟骨細(xì)胞能分泌和響應(yīng)一系列的生長(zhǎng)因子，包括IGF-1和IL1。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞是研究軟骨修復(fù)和關(guān)節(jié)炎病理的有用模型。
|
組織來(lái)源
|
產(chǎn)品規(guī)格
|
貨號(hào)
|
用途
|
|
椎體終板軟骨關(guān)節(jié)組織
|
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
|
A01X1671
|
僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
|
細(xì)胞特性：
1） 組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的椎體終板軟骨關(guān)節(jié)組織。
2） 細(xì)胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)熒光染色為陽(yáng)性。
3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5） 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭狀，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 軟骨 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
SP-AELISAKit
內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)elisa分析檢測(cè)試劑盒
eNOS ELISA Kit
人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanPSMB1ELISAkit
肝素（heperin）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子1(RFT1)elisa檢測(cè)試劑盒
磷酸二酯酶7B（Phosphodiesterase
7B）
小鼠彈性蛋白(ELN)elisa檢測(cè)試劑盒
連接蛋白JPH3抗體
Junctophilin 3
共濟(jì)失調(diào)性眼球運(yùn)動(dòng)功能喪失相關(guān)蛋白AOA1抗體
Aprataxin
大鼠單胺氧化酶(MAO)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠長(zhǎng)停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)elisa檢測(cè)試劑盒
人補(bǔ)體片斷5a(C5a)elisa分析檢測(cè)試劑盒
植物異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase；IDH）
基因蛋白4抗體
REG4
中心體蛋白152抗體
CEP152
泛素特異性蛋白酶28抗體 Anti-USP28
原鈣粘蛋白15抗體 Anti-PCDHB15/PCDHB22
原鈣粘蛋白γ10抗體 Anti-PCDHGA10
磷酸化自噬相關(guān)蛋白1抗體 Anti-Phospho-ATG1(Ser556)
APC標(biāo)記的羊抗小鼠IgG H&L
大鼠椎體終板軟骨細(xì)胞30%ACRYLAMIDE-BIS（29:1）溶液
體外微管蛋白聚合作用（polymerization）熒光檢測(cè)試劑盒
Beta catenin
interacting protein 1; Beta catenin interacting protein ICAT; Catenin beta
interacting protein 1; CTNNBIP 1; ICAT; Inhibitor of beta catenin and Tcf 4;
MGC15093; CNBP1_HUMAN.
大鼠椎體終板軟骨細(xì)胞
人心肌成纖維細(xì)胞
D407(視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞)
MRC-5（有限細(xì)胞系）人胚肺成纖維細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。
根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊(cè)會(huì)員自行發(fā)布，若信息的真實(shí)性、合法性存在爭(zhēng)議，平臺(tái)將會(huì)監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報(bào)