實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
小鼠海馬神經(jīng)元細胞
細胞簡介：
小鼠海馬神經(jīng)元細胞分離自海馬體；海馬體(Hippocampus)，又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負責(zé)記憶和學(xué)習(xí)。海馬神經(jīng)元細胞是海馬區(qū)的主要細胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學(xué)習(xí)、記憶、情緒反應(yīng)及神經(jīng)系統(tǒng)的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元相對獨立分布的特點，境界相對清晰，便于取材，因此，海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究者當(dāng)做理想的實驗?zāi)Ｐ?。海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實驗研究中已被廣泛應(yīng)用。
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組織來源
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產(chǎn)品規(guī)格
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貨號
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用途
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腦海馬體
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5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
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A01X1948
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僅供科研研究實驗
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培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠海馬神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經(jīng)元培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠海馬神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
土壤α-葡萄糖苷酶（S-α - GC）測試盒
人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)elisa分析檢測試劑盒
細胞組織B（CATHEPSIN
B）活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠絡(luò)絲蛋白(RL)elisa檢測試劑盒
大鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa檢測試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)elisa檢測試劑盒
大鼠激肽原(KNG)elisa分析檢測試劑盒
組織SYK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人抗精子抗體（AsAb）elisa檢測試劑盒
AF750標(biāo)記的白介素1β抗體 IL-1 Beta, Alexa
Fluor 750 conjugated
APC-Cy7標(biāo)記人CD25單克隆抗體 human CD25/APC-Cy7
精子發(fā)生相關(guān)蛋白9抗體 SPATA9
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體 CCDC92
TBC結(jié)構(gòu)域家族D4蛋白抗體 phospho-TBC1D4
(Ser588)
T細胞易位蛋白2抗體 LMO2
唾液酸糖蛋白受體1抗體 ASGPR1
味覺受體蛋白家族2亞基5抗體 TAS2R5
HEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白1蛋白抗體 HEATR1
IQCK蛋白抗體 IQCK
配體依賴核受體共抑制因子抗體 MLR2
橋粒斑菲素蛋白4抗體 Plakophilin 4
富含半胱氨酸蛋白質(zhì)MIG7抗體 MIG7
鈣結(jié)合蛋白D28K重組兔單克隆抗體 Calbindin
抑癌蛋白TCHP抗體 TCHP
增強型黃色熒光蛋白單克隆抗體 EYFP
大鼠E3-RSIκB
elisa分析檢測試劑盒
小鼠海馬神經(jīng)元細胞小鼠防御素α1(DEFα1)elisa檢測試劑盒
大鼠elisa分析檢測試劑盒
Cadherin 6;
Cadherin6; Cadherin-6; Cadherin 6 type 2; Cadherin fetal kidney; Cadherin6; CDH
6; CDH6; KCAD; Kidney cadherin; CADH6_HUMAN.
小鼠海綿體內(nèi)皮細胞
兔視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞
M2-10B4小鼠骨髓纖維原細胞
HT29 gluc C1白種人結(jié)腸腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。
根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。
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