培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
兔羊膜間充質(zhì)干細胞
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產(chǎn)品名稱
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兔羊膜間充質(zhì)干細胞
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產(chǎn)品規(guī)格
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5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
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組織來源
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羊膜
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生長特性
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貼壁
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細胞形態(tài)
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成纖維細胞樣
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分類
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兔原代細胞
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貨號
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A01X2250
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用途
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僅供科研實驗
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培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔羊膜間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介：
兔羊膜間充質(zhì)干細胞分離自胎盤羊膜組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿浴ＬケP還產(chǎn)生多種維持妊娠的，是一個重要的器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細胞，包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑，無血管、神經(jīng)及，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。
方法簡介：
實驗室分離的兔羊膜間充質(zhì)干細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔羊膜間充質(zhì)干細胞經(jīng)CD44熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人骨形成蛋白4(BMP4)elisa分析檢測試劑盒
犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa檢測試劑盒免費代測
全組織NADH心肌黃酶（NADH-TR）活性染色試劑盒
小鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素33(IL-33)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞功能相關抗原3(LFA-3/CD58)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠肺表面活性物質(zhì)相關蛋白C(SP-C)elisa檢測試劑盒
組織纖維素酶（cellulase）活性比色法定量檢測試劑盒
人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,2(PSMB2)elisa分析檢測試劑盒
5色氨酸羥化酶2抗體 TPH2
9號染色體開放閱讀框5抗體 C9orf5
甲基化樣蛋白2B抗體 METTL2B
間隙連接蛋白30/GJB6抗體 connexin 30
Rho GTP酶激活蛋白26抗體 GRAF
SAFB蛋白抗體 SAFB
髓鞘堿性蛋白/磷脂堿性蛋白抗體 MBP
糖脂轉(zhuǎn)移蛋白結(jié)構(gòu)域2抗體 GLTPD2
FRMD5蛋白抗體 FRMD5
GW182蛋白抗體 GW182
膜內(nèi)蛋白酶5抗體 SPPL2C
腦環(huán)核苷酸門控通道蛋白1/HCN1抗體 HCN1
多發(fā)性肌炎/硬皮病自身抗原2抗體 EXOSC10
泛素蛋白抗體 Ubiquitin
血漿激肽釋放酶輕鏈抗體 Plasma kallikrein light
chain
胰腺彈性蛋白酶2B抗體 Elastase-2B
NAD激酶（NADK）測試盒
兔羊膜間充質(zhì)干細胞小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)elisa分析檢測試劑盒
大鼠脂肪酸去飽和酶1(FADS1)elisa檢測試劑盒
CLR11.1; NACHT,
leucine rich repeat and PYD containing 10; NACHT, LRR and PYD domains
containing protein 10; NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 10;
NAL10_HUMAN; NALP10; NLR family, pyrin domain containing 10; Nlrp10; NOD8;
Nucleotide-binding oligomerization domain protein 8; Nucleotide-binding
oligomerization domain, leucine rich repeat and pyrin domain containing 10;
PAN5; PYNOD.
兔胰島細胞
兔牙髓干細胞
4T1小鼠乳腺癌細胞
HGC-27人胃癌細胞
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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