實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
兔成骨細胞
細胞簡介：
兔成骨細胞分離自顱骨組織；顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié)，起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內(nèi)有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu)，構(gòu)成面部的支架，共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞，負責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細胞移行至被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統(tǒng)的分子和細胞學(xué)基礎(chǔ)，也是篩選、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。
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組織來源
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產(chǎn)品規(guī)格
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貨號
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用途
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顱骨組織
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5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
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A01X2139
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僅供科研研究實驗
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培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的兔成骨細胞采用先用胰蛋白酶短時間消化、后用膠原酶反復(fù)消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的兔成骨細胞經(jīng)ALP染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
含Earle平衡鹽
大鼠磷脂酶A2(PL-A2)elisa檢測試劑盒
豬成纖維細胞生長因子19(FGF19)elisa分析檢測試劑盒
人病毒(PV)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
植物直鏈淀粉比色法定量檢測試劑盒
小鼠可溶性CD40配體(sCD40L)elisa分析檢測試劑盒
大鼠12羥二十烷四烯酸(12-HETE)elisa檢測試劑盒
載玻片細胞IP3R受體蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
犬S100B蛋白(S100B)elisa分析檢測試劑盒
誘捕受體2抗體 DcR2
早老素γ分泌酶2抗體 PEN2
非紅細胞血影腦蛋白β2/spectrin β III抗體 SPTBN2
富含亮氨酸軟骨蛋白抗體 CHAD
G蛋白偶聯(lián)受體78抗體 GPR78
Hermansky-Pudlak綜合征蛋白3抗體 HPS3
鳥嘌呤核苷酸交換因子CLLD7抗體 CLLD7
平滑肌蛋白LMOD2抗體 LMOD2
AF750標(biāo)記的NFkB誘導(dǎo)激酶抗體 MAP3K14/NFkB
Inducing Kinase, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy7標(biāo)記人CD14單克隆抗體 human CD14/APC-Cy7
精子發(fā)生相關(guān)蛋白31A2抗體 SPATA31A2
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體 CCDC89
TBC結(jié)構(gòu)域TBCD4蛋白抗體 TBC1D4
T細胞識別的鱗狀細胞癌SART3抗體 SART3
唾液酸結(jié)合性球蛋白樣凝集素7抗體 SIGLEC7
細胞分裂周期蛋白25C單克隆抗體 CDC25C
植物氫/鉀ATP酶（H＋/K＋－ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒
兔成骨細胞人白介素22(IL-22)elisa檢測試劑盒
大鼠補體片斷3a(C3a)elisa檢測試劑盒
ARH; ARH GENE;
ARH_HUMAN; ARH1; ARH2; Autosomal recessive hypercholesterolemia protein; FHCB1;
FHCB2; LDL receptor adaptor protein; Ldlrap1; Low density lipoprotein receptor
adapter protein 1.
兔大隱靜脈內(nèi)皮細胞
小鼠脊髓微血管內(nèi)皮細胞
NCI-H929人骨髓瘤細胞
E14小鼠胚胎干細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當(dāng)單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。
根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。
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