實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
大鼠食管上皮細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠食管上皮細(xì)胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降，而逐漸增長(zhǎng)。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過程中，食管的上皮細(xì)胞增殖，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復(fù)層扁平上皮，耐摩擦，有保護(hù)作用。在食管與胃賁門交界處，復(fù)層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。食管被一層線性排列的、無(wú)角化、潮濕的復(fù)層扁平上皮細(xì)胞覆蓋，其頂端細(xì)胞膜和細(xì)胞間連接復(fù)合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細(xì)胞的基質(zhì)外側(cè)細(xì)胞膜和深層細(xì)胞的全部細(xì)胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動(dòng)的滲透壓之下。從組織學(xué)上講，食管上皮由兩層組成，基底層和分化層；其中，僅基底層的細(xì)胞可以增殖，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標(biāo)記的依序表達(dá)。食管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機(jī)制和食管癌變機(jī)制的非常好的體外模型。
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組織來(lái)源
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產(chǎn)品規(guī)格
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貨號(hào)
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用途
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食管組織
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5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
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A01X1554
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僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
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培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管上皮細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
AQP-4ELISAKit
大鼠超氧化物歧化酶1,可溶性(SOD1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
soluble(SOD1)ELISA
kit
人甲狀腺刺激球蛋白(TSI)elisa分析檢測(cè)試劑盒
TSIELISAKit
分子伴侶復(fù)合體TCP-1α抗體 Anti-TCP1 alpha
RAB3-GTP酶激活蛋白催化亞單位2抗體 Anti-RAB3GAP2
神經(jīng)細(xì)胞正五聚體1抗體 Anti-NPTX1/NP1
VWCE抗體 Anti-VWCE
植物L-抗壞血酸過氧化物酶2,細(xì)胞質(zhì)(APX2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
cytosolic(APX2)ELISA
kit
人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanMAPKAPK3ELISAKit
雌二醇(E2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
肌酸激酶（CK）活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒
小鼠骨鈣素(OT)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠白介素18(IL-18)elisa檢測(cè)試劑盒
核帽結(jié)合蛋白2抗體
NCBP2
5號(hào)染色體開放閱讀框4抗體
C5ORF4
四分子交聯(lián)體10抗體（四旋蛋白） Anti-TSPAN10/Oculospanin
黑色素瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體 Anti-PRAME
氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生長(zhǎng)抑制因子1抗體 Anti-OSGIN1
環(huán)指蛋白142抗體 Anti-SH3MD2/RNF142
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗猴IgG H&L
大鼠食管上皮細(xì)胞Rabbit Anti-Monkey IgG H&L / PE-Cy5.5
神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白3抗體
EAA 1; EAA1;
Excitatory amino acid receptor 1; Glutamate receptor; Glutamate receptor
ionotropic kainate 4; Glutamate receptor ionotropic kainate 4 precursor;
Glutamate receptor KA 1; Glutamate receptor KA 1precursor; Glutamate receptor
KA-1; Glutamate receptor KA1; Glutamate receptor, ionotropic kainate 4; GRIK 4;
GRIK; GRIK4; GRIK4_HUMAN; ionotropic kainate 4; KA 1; KA1; OTTHUMP; OTTHUMP.
大鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞
小鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
HCC1937人乳腺癌細(xì)胞
bEnd.3 [BEND3]（小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株）
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。
根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。
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