培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi)，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進(jìn)行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除，然后將肝組織反復(fù)剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標(biāo)記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞，這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞
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產(chǎn)品名稱
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大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞
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產(chǎn)品規(guī)格
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5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
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組織來源
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結(jié)腸
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生長特性
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貼壁
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細(xì)胞形態(tài)
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成纖維細(xì)胞樣
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分類
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大鼠原代細(xì)胞
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貨號
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A01X1566
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用途
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僅供科研實(shí)驗(yàn)
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培養(yǎng)信息：
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡介：
大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結(jié)腸成纖維細(xì)胞主要分布于外膜（纖維膜或漿膜）結(jié)締組織內(nèi)。成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的結(jié)腸成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
DMEM完全培養(yǎng)液
小鼠破傷風(fēng)(Tetanus)抗體elisa分析檢測試劑盒
大鼠肝細(xì)胞生長因子激活物(HGFA)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測
細(xì)胞組織D（CATHEPSIN
D）活性比色法定量檢測試劑盒
人多萜長醇二磷酸寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(DDOST/OST-48)elisa檢測試劑盒
大鼠孕烷X受體(PXR)elisa檢測試劑盒
FSH-BETA蛋白共沉淀分析試劑盒
小鼠β防御素(β-Defensin)elisa檢測試劑盒
硝酸還原酶NR測試盒 100管/48樣 50管/24樣 可見光比色法
AU5 tag標(biāo)簽抗體 AU5 tag
B細(xì)胞特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體 BOB1
賴氨酸N甲基轉(zhuǎn)移酶1D/EHMT1抗體 KMT1D
亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域蛋白ROGDI抗體 ROGDI
α葡萄糖苷酶2抗體 GANAB
阿黑皮素原抗體 POMC
細(xì)胞角蛋白26抗體 KRT26
細(xì)胞色素P450 IVF8抗體 CYPIVF8
KPRP蛋白抗體 KPRP
MAP激酶激活死亡域蛋白2C抗體 DENND2C
熱休克蛋白-20抗體 HSPB6
絨毛膜特異性轉(zhuǎn)錄因子GCMa抗體 GCMA
干擾素α受體2抗體 IFNAR2
谷氨酸受體2A抗體 NMDAR2A
著絲粒蛋白Q抗體 CENPQ
重組兔血管緊張素轉(zhuǎn)換酶單克隆抗體 ACE2
人1,25二羥基維生素D3(1,25
DHVD3)elisa分析檢測試劑盒
大鼠結(jié)腸成纖維細(xì)胞組織巨噬細(xì)胞型抗酒石酸酸性磷酸酶（STRACP）活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠分泌型卷曲相關(guān)蛋白4(SFRP4)elisa檢測試劑盒
GlialCAM;
HECAM_HUMAN; HEPACAM; Hepatocyte cell adhesion molecule; Protein hepaCAM.
大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞
羊肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞
CAOV-3人卵巢腺癌細(xì)胞
AAV-293人胚腎細(xì)胞
原代細(xì)胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
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