細(xì)胞活性的檢測方法

細(xì)胞生物活性測定是指評(píng)估細(xì)胞在特定條件下維持或恢復(fù)其代謝、增殖等生理功能的能力。這種檢測對(duì)于理解細(xì)胞狀態(tài)、分析毒性、比較細(xì)胞增殖能力和進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)等至關(guān)重要，常用的方法包括：

1、染色計(jì)數(shù)法：

臺(tái)盼藍(lán)染色法：通過死細(xì)胞著色，活細(xì)胞不著色來區(qū)分，操作簡單，價(jià)格低廉，但臺(tái)盼藍(lán)染色時(shí)間不宜過長，且細(xì)胞沒有經(jīng)過固定，形態(tài)不清晰。

熒光染色法：如碘化丙啶（PI）、吖啶橙（AO）、溴乙錠（EB），尤其是AO-PI雙染法，可以分辨活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞、凋亡晚期細(xì)胞、死亡細(xì)胞，具有高靈敏度和操作簡便的特點(diǎn)，但需要特殊儀器如熒光顯微鏡。

2、克?。洌┬纬稍囼?yàn)：測定單個(gè)細(xì)胞增殖能力的有效方法，通過計(jì)算克隆形成率評(píng)估細(xì)胞增殖潛力，常見于抗腫瘤敏感性試驗(yàn)，但操作繁瑣，耗時(shí)較長。

3、比色法：

MTT法：基于線粒體內(nèi)脫氫酶活性，活細(xì)胞還原MTT為甲瓚，需DMSO溶解，操作簡單，但需更換溶液。

XTT法、CCK-8法：類似于MTT，但產(chǎn)物水溶性，無需更換溶液，更簡便，對(duì)細(xì)胞無毒性，適合多次測定。

Alamar Blue法：利用刃天青檢測細(xì)胞增殖，氧化態(tài)和還原態(tài)有不同顏色，適用于吸光或熒光檢測。

4、熒光染料檢測：

CFSE檢測法：標(biāo)記活細(xì)胞，追蹤細(xì)胞分裂增殖過程。

鈣黃綠素（Calcein AM）檢測法：結(jié)合碘化丙啶染色，同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。

5、化學(xué)發(fā)光法：

ATP水平測定法：通過熒光素酶檢測ATP水平，反映細(xì)胞增殖情況，靈敏度高，操作簡單。

6、DNA合成檢測：

Brdu法、EdU法：追蹤DNA合成和細(xì)胞增殖，適用于熒光、流式細(xì)胞儀檢測。

7、其他方法：

LDH釋放法：通過檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶的活性來評(píng)估細(xì)胞損傷和死亡，適用于細(xì)胞活性檢測。

SRB法：硫化羅丹明結(jié)合蛋白，可用于細(xì)胞蛋白含量的測定，間接反映細(xì)胞活性。

每種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，選擇時(shí)需考慮實(shí)驗(yàn)需求、細(xì)胞類型、操作便捷性和成本等因素。例如，對(duì)于需要高通量篩選的實(shí)驗(yàn)，ATP檢測或CCK-8法可能更合適；而需要實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測細(xì)胞活力的實(shí)驗(yàn)，則可能更傾向于熒光染料檢測。