解決qPCR無(wú)Ct信號(hào)出現(xiàn)現(xiàn)象:
1、反應(yīng)循環(huán)參數(shù)不夠,一般要在35個(gè)循環(huán)以上,但是過(guò)多的循環(huán)次數(shù)可增加背景值。
2、檢測(cè)熒光信號(hào)的步驟有誤。SYBRgreen法(SG法)采用的是72延伸時(shí)采集熒光信號(hào),taqman法則是在退火結(jié)束或延伸結(jié)束時(shí)進(jìn)行信號(hào)采集。
3、引物或探針降解,可用PAGE電泳檢測(cè)其完整性,若是電泳條帶呈彌散狀,可考慮重新合成引物或探針。
4、模板不足或降解,則可以重新提取核酸模板。