WB抗原抗體反應(yīng)流程：
 
a. 0.1% TBST潤(rùn)洗封閉后的NC膜3次，每次5 min；
 
b. 稀釋一抗：稀釋液通常為脫脂牛奶或0.1% TBST，比例通常為1：1000（稀釋比例參見(jiàn)抗體說(shuō)明書(shū)）；
 
c. 孵育一抗：4 ℃下?lián)u床，過(guò)夜封閉；
 
d. 回收一抗，-20℃保存供重復(fù)使用，0.1% TBST潤(rùn)洗NC膜3次，每次5 min；
 
e. 孵育二抗：0.1% TBST稀釋HRP標(biāo)記的對(duì)應(yīng)種屬的二抗，比例為1：5000-1：10000，室溫下?lián)u床孵育60 min；
 
f. 0.1% TBST潤(rùn)洗NC膜3次，每次10 min；
 
tips：抗體孵育條件、時(shí)間等詳見(jiàn)《【W(wǎng)estern-Blotting】WB核心理論：抗原抗體特異性反應(yīng)》；