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分光光度法的基本原理
分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析的方法。它具有靈敏度高、操作簡便、快速等優(yōu)點,是生物化學實驗中常用的實驗方法。許多物質(zhì)的測定都采用分光光度法。在分光光度計中,將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時,便可得到與不同波長相對應的吸收強度。
物質(zhì)與光作用,具有選擇吸收的特性。有色物質(zhì)的顏色是該物質(zhì)與光作用產(chǎn)生的。即有色溶液所呈現(xiàn)的顏色是由于溶液中的物質(zhì)對光的選擇性吸收所致。由于不同的物質(zhì)其分子結構不同,對不同波長光的吸收能力也不同,因此具有特征結構的結構集團,存在選擇吸收特性的大實收波長,形成大吸收峰,而產(chǎn)生特有的吸收光譜。即使是相同的物質(zhì)由于其含量不同,對光的吸收程度也不同。利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)的存在(定性分析),或利用物質(zhì)對一定波長光的吸收程度來測定物質(zhì)含量(定量分析)的方法,稱為分光光度法。
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