如果出現(xiàn)了引物二聚體，有許多方法可以減少或消除反應(yīng)中的引物二聚體。

1、 首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件，這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下，兩步循環(huán) (由 95°C 變性步驟直接進(jìn)入60°C 退火和延伸步驟) 有利于強(qiáng)效擴(kuò)增，因此引物設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)定的成功退火溫度為 60°C。

2、可降低引物濃度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下，每條引物的理想終濃度為 200 nM，但如有需要，可將濃度降至 60 nM。

3、鎂的合適濃度一般約為 3 mM。高于此濃度易形成引物二聚體。

4、如果未對(duì)引物形成二聚體的傾向進(jìn)行評(píng)估，則應(yīng)補(bǔ)充評(píng)估并考慮重新設(shè)計(jì) (如有需要)。通常情況下，好使用熱啟動(dòng) DNA 聚合酶，并在冰上進(jìn)行反應(yīng)。

5、在理論上，針對(duì)同一靶點(diǎn)應(yīng)同時(shí)檢測(cè)多個(gè)引物組。這實(shí)際上可以節(jié)省大量時(shí)間，因?yàn)槿绻@些引物中的一個(gè)能立即發(fā)揮作用，則可以減少花費(fèi)在優(yōu)化過。

大鼠骨成型蛋白受體1Aelisa試劑盒圖片檢測(cè)中樣品的處理

1．細(xì)胞培養(yǎng)物上清：細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．血清：標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4．尿液：無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測(cè)，要長(zhǎng)期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。

5．組織勻漿：將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。注：取樣和樣品處理過程中，防止有毒物質(zhì)對(duì)操作人員的危害，要采取相應(yīng)的保護(hù)措施。