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如何預(yù)防細(xì)胞支原體污染? 支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中常見的問題,它可能對(duì)細(xì)胞的生長、代謝、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性產(chǎn)生嚴(yán)重影響,甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。由于支原體污染通常沒有明顯的外觀變化,因此預(yù)防顯得尤為重要。以下是一些關(guān)鍵步驟:一、源頭控制從可靠供應(yīng)商獲取無支原體細(xì)胞系。新引入的細(xì)胞需在隔離培養(yǎng)箱中培養(yǎng),并進(jìn)行支原體檢測(cè),確認(rèn)陰性后方可與其他細(xì)胞共用。定期篩查工作細(xì)胞庫中的支原體污染情況,建議每3-6個(gè)月檢測(cè)一次二、選擇無菌試劑和耗材:1發(fā)布時(shí)間:2025-10-30 09:49 點(diǎn)擊次數(shù):0 次
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ELISA試劑盒與生化試劑盒的正確使用方法 一、ELISA試劑盒操作規(guī)范1.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?試劑檢查?:確認(rèn)試劑盒種屬、成分及包裝完整性,檢查運(yùn)輸溫度是否符合要求。?試劑復(fù)溫?:所有試劑需恢復(fù)至室溫(20-25℃)使用,復(fù)溫時(shí)間約1.5-2小時(shí)。?儀器校準(zhǔn)?:移液槍需定期校正,酶標(biāo)儀應(yīng)預(yù)熱并設(shè)置好檢測(cè)程序。2.標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)品加入1ml稀釋液靜置10分鐘后混勻,進(jìn)行7管等倍稀釋(第8管為空白對(duì)照)。發(fā)布時(shí)間:2025-10-23 11:02 點(diǎn)擊次數(shù):1 次
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自配ELISA試劑盒的注意事項(xiàng) 自配ELISA試劑盒需嚴(yán)格把控試劑保存、操作流程、樣本處理、避免交叉污染等關(guān)鍵環(huán)節(jié),以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。一、試劑配制與保存:?緩沖液配制?:需使用高質(zhì)量蒸餾水或去離子水,自配緩沖液需用pH計(jì)校正(如Tris-HCl、PBS等),避免使用過期或變質(zhì)的試劑?。?抗體/酶標(biāo)記物保存?:分裝后-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融;含甘油或BSA的保存液可降低蛋白變性風(fēng)險(xiǎn)。?底物溶液避光?:TM發(fā)布時(shí)間:2025-10-15 09:50 點(diǎn)擊次數(shù):2 次
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ELISA試劑盒中酶標(biāo)抗體有哪些種類? ELISA試劑盒中的酶標(biāo)抗體是一種經(jīng)過特殊處理的抗體,它的作用是將mianyi反應(yīng)與酶催化反應(yīng)相結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)抗原或抗體的高靈敏度檢測(cè)。ELISA試劑盒中常用的酶標(biāo)抗體主要包括:一、?按標(biāo)記酶分類1、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗體:這是常見的一種酶標(biāo)記抗體,因其催化活性強(qiáng)、穩(wěn)定性好,廣泛應(yīng)用于各種ELISA檢測(cè)。HRP在底物如TMB或OPD作用下能產(chǎn)生明顯的顏色變化,便于肉眼觀察和儀器檢測(cè)發(fā)布時(shí)間:2025-10-08 10:06 點(diǎn)擊次數(shù):2 次
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確認(rèn)ELISA試劑盒檢測(cè)范圍的方法步驟 ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍指的是該試劑盒能夠準(zhǔn)確檢測(cè)的目標(biāo)物質(zhì)的濃度區(qū)間。這個(gè)范圍通常在試劑盒的說明書中有明確標(biāo)注,它涵蓋了標(biāo)準(zhǔn)曲線的*低檢測(cè)限和*高檢測(cè)限。檢測(cè)范圍的選擇應(yīng)根據(jù)預(yù)期樣本中目標(biāo)物的濃度來確定,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。確認(rèn)ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍是否合適,需要遵循以下步驟:一、查閱說明書中的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍?試劑盒的檢測(cè)范圍通常以標(biāo)準(zhǔn)曲線(標(biāo)曲)的線性范圍表示,需確保待測(cè)樣本濃發(fā)布時(shí)間:2025-09-26 09:45 點(diǎn)擊次數(shù):1 次
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熒光定量PCR的準(zhǔn)確性受哪些因素影響 熒光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR,qPCR)是一種在DNA擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化的生物技術(shù)。它通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光標(biāo)記探針,實(shí)時(shí)跟蹤PCR產(chǎn)物的生成。熒光定量PCR的準(zhǔn)確性可能會(huì)受到多種因素的影響,包括但不限于:1、操作規(guī)范包括加樣精度、污染控制(如手套更換、紫外線xiaodu)及移液器清潔度,操作失誤易引發(fā)假陽性/陰性。?2、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)引發(fā)布時(shí)間:2025-08-25 14:12 點(diǎn)擊次數(shù):6 次
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小鼠ELISA試劑盒特點(diǎn)分析 小鼠ELISA試劑盒特點(diǎn)分析小鼠ELISA試劑盒是一種用于檢測(cè)小鼠體內(nèi)特定生物分子(如抗體、細(xì)胞因子等)濃度的診斷工具。它基于酶聯(lián)吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù),通過將特異性抗體包被在微孔板上,然后加入待測(cè)樣品和酶標(biāo)記的抗體,形成復(fù)合物,后通過酶催化底物顯色,通過檢測(cè)吸光度來定量分析目標(biāo)分子。小鼠ELISA試劑盒在生命科學(xué)研究中扮演著重要角色,尤其在檢測(cè)小鼠血清、血漿或其他生物液體中的特定蛋白或抗體時(shí)發(fā)布時(shí)間:2025-08-14 10:58 點(diǎn)擊次數(shù):18 次
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生化試劑的不同級(jí)別介紹 生化試劑的不同級(jí)別:1.熒光級(jí):熒光HPLC級(jí)是有梯度的并且是熒光控的,特別適合于用熒光HPLC分析PAH;2.合成純:適用于有機(jī)合成和預(yù)制的應(yīng)用;3.特級(jí)純:適用于普通實(shí)驗(yàn)室工作,一般情況下符合大部分藥典(BP,USP,etc.)標(biāo)準(zhǔn);4.藥典級(jí):純度符合Pharmaco-poeia的標(biāo)準(zhǔn),如(NF,BP,USP,PHEUR,DAB,DAC,JP,PH法郎);5.分析純:適用于分析、研究和質(zhì)量質(zhì)發(fā)布時(shí)間:2025-08-04 14:58 點(diǎn)擊次數(shù):25 次
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血清不穩(wěn)定的原因有哪些? 血清大的劣勢(shì)就是不穩(wěn)定,不穩(wěn)定原因如下:1、來源不穩(wěn)定以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,取出胎牛,在低溫?zé)o菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條,動(dòng)物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,我國在對(duì)牛血清的質(zhì)量《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求,包括蛋白質(zhì)含量,**、**、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體發(fā)布時(shí)間:2025-07-28 16:53 點(diǎn)擊次數(shù):17 次
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ELISA 實(shí)驗(yàn)中血漿應(yīng)用說明 ELISA實(shí)驗(yàn)中血漿的采集、處理和保存:1、真空采血針采集2ml新鮮血液,加入無菌試管中;2、按1:9加入抗凝劑(EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉),30分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以減少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集);3、將采集血液用離心機(jī)4℃,2500rpm離心5min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。4、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下,可放置保存24-48小時(shí);-20℃下,可放置保存發(fā)布時(shí)間:2025-07-09 13:53 點(diǎn)擊次數(shù):19 次
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細(xì)胞凍存具體流程?? 凍存是長期保存細(xì)胞的重要方法,利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于液氮中保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,細(xì)胞進(jìn)入一種假死狀態(tài)。細(xì)胞凍存具體流程:1.取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞移至離心管中。對(duì)數(shù)期細(xì)胞是細(xì)胞增殖過程中活力旺盛的時(shí)期,也是凍存細(xì)胞的合理時(shí)期,對(duì)于貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶分離成單個(gè)細(xì)胞再收集到離心管中,懸浮細(xì)胞可直接移至離心管中。2.離心去除胰蛋白酶及培養(yǎng)液,加入凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打發(fā)布時(shí)間:2025-07-04 11:39 點(diǎn)擊次數(shù):15 次
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PCR反應(yīng)模板濃度過低解析 在進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí),如果模板濃度過低,會(huì)顯著影響擴(kuò)增效果,導(dǎo)致產(chǎn)物量減少。這是因?yàn)镻CR擴(kuò)增的產(chǎn)物量遵循公式Nt=N0×2^t,其中N0是初始模板量的拷貝數(shù),t是擴(kuò)增的循環(huán)次數(shù)。理論上,擴(kuò)增產(chǎn)物量是指數(shù)增長的,但實(shí)際操作中,隨著反應(yīng)體系體積的揮發(fā)和溶液離子濃度的變化,以及產(chǎn)物、引物、模板濃度的動(dòng)態(tài)調(diào)整,擴(kuò)增效率會(huì)受到影響。模板濃度過低時(shí),起始的DNA拷貝數(shù)少,即使經(jīng)過足夠的循環(huán)次數(shù),終的產(chǎn)物量也會(huì)發(fā)布時(shí)間:2025-06-26 10:11 點(diǎn)擊次數(shù):6 次
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減少或消除PCR反應(yīng)中的引物二聚體方法 如果出現(xiàn)了引物二聚體,有許多方法可以減少或消除反應(yīng)中的引物二聚體。1、 首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件,這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下,兩步循環(huán)(由95°C變性步驟直接進(jìn)入60°C退火和延伸步驟)有利于強(qiáng)效擴(kuò)增,因此引物設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)定的成功退火溫度為60°C。2、可降低引物濃度,甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下,每條引物的理想終濃度為200nM,但如有需要,可將濃度降至60發(fā)布時(shí)間:2025-06-16 14:42 點(diǎn)擊次數(shù):19 次
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)方法 所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。檢測(cè)方法:1.SYBRGreenⅠ法:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。2.Taq發(fā)布時(shí)間:2025-06-10 10:54 點(diǎn)擊次數(shù):22 次
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RT-qPCR統(tǒng)計(jì)敘述 每個(gè)基因在不同組別中的表達(dá)在獲得3個(gè)重復(fù)的Ct值后,從ABI系統(tǒng)中拷貝原始數(shù)據(jù),挑出“CtSD”值大于0.5的組別(需重新實(shí)驗(yàn)),求出各個(gè)組的管家基因GAPDH的均值(一般相差1個(gè)Ct值以內(nèi)),再依次求出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組與各自的GAPDH之間的Ct差值,即得到第1個(gè)ΔCt,隨后求出實(shí)驗(yàn)組ΔCt和對(duì)照組ΔCt的差值,即可得到第2個(gè)ΔCt(ΔΔCt),zui后使用2-ΔΔCt法求出實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組發(fā)布時(shí)間:2025-05-27 10:32 點(diǎn)擊次數(shù):27 次