溶血是指紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白，可能導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)背景偏高或假陽(yáng)性結(jié)果。因此，在進(jìn)行ELISA檢測(cè)前，必須對(duì)樣本進(jìn)行溶血評(píng)估和處理。

一、肉眼觀察法：?

?標(biāo)準(zhǔn)判斷?：正常血清呈淡黃色透明或半透明，若樣本呈紅色或粉紅色則提示溶血。

?操作要點(diǎn)?：采集后立即觀察，避免光照導(dǎo)致顏色變化誤判。

二、樣本預(yù)處理：

對(duì)疑似溶血的樣本進(jìn)行離心處理，以去除紅細(xì)胞碎片和血紅蛋白等干擾物質(zhì)，減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

三、?分光光度法：?

?檢測(cè)原理?：血紅蛋白在405nm處有特征吸收峰，OD值>0.1提示溶血。

四、?操作步驟?：

取100μL樣本與900μL生理鹽水混合；

405nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度，空白對(duì)照為生理鹽水。

?ELISA干擾驗(yàn)證?

?加標(biāo)實(shí)驗(yàn)?：將溶血樣本與正常樣本分別檢測(cè)同一目標(biāo)物，若OD值差異>15%則判定溶血干擾。

五、注意事項(xiàng)：?

?避免假陰性?：嚴(yán)重溶血樣本需棄用，輕微溶血樣本可離心（3000×g，10分鐘）后復(fù)測(cè)。

?抗凝劑選擇?：EDTA抗凝血可減少溶血風(fēng)險(xiǎn)，避免使用肝素抗凝劑。

溶血樣本的檢測(cè)與處理是ELISA實(shí)驗(yàn)中不可忽視的環(huán)節(jié)。通過(guò)觀察樣本顏色和預(yù)處理離心，可有效判斷和減少溶血對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。若發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重溶血，建議重新采集樣本以確保結(jié)果準(zhǔn)確。?