原代細(xì)胞（primary culture cells）是指從動物或人體組織中直接分離并初次培養(yǎng)的細(xì)胞。具體來說，它們是通過酶（如胰蛋白酶）或機(jī)械方法從組織中分離出來的單個細(xì)胞，在體外環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。

在進(jìn)行原代細(xì)胞提取時，避免污染是至關(guān)重要的。以下是一些關(guān)鍵步驟和注意事項(xiàng)：

一、環(huán)境與材料的無菌化處理

1、實(shí)驗(yàn)環(huán)境準(zhǔn)備：提取操作需在生物anquan柜或超凈臺內(nèi)進(jìn)行，操作前開啟紫外燈xiaodu30分鐘，隨后用75%酒精擦拭臺面及所有放入的物品。細(xì)胞房需專用隔離衣、拖鞋及xiaodu設(shè)備，培養(yǎng)箱內(nèi)加入硫酸銅溶液抑制污染，并定期更換CO?罐。

2、材料與試劑miejun：所有耗材（槍頭、離心管、培養(yǎng)瓶等）需無菌處理，培養(yǎng)瓶可提前用1%明膠包被并預(yù)溫至37℃4。培養(yǎng)基建議添加青霉素-鏈霉素雙抗，并分裝使用以減少反復(fù)開封污染。

二、組織樣本處理的關(guān)鍵步驟

1、樣本采集與xiaodu：以動物組織為例，需將供體（如BALB/c小鼠）全身浸泡于75%乙醇中xiaodu，避免體毛污染。內(nèi)臟器官（如肺、心臟）取出后，需用預(yù)冷的HBSS或PBS反復(fù)沖洗，去除血液及雜質(zhì)。

2、樣本處理與分離

動物樣本（如小鼠）需用乙醇浸泡xiaodu，分離骨骼時避免剪斷導(dǎo)致骨髓暴露，減少血液污染風(fēng)險?。

口腔組織提取時，需徹底沖洗血污，并分區(qū)域處理（如牙齦、牙髓）。

3、器械與耗材處理

使用高壓miejun的剪刀、鑷子等工具，操作前用75%乙醇浸泡xiaodu。

超凈臺需提前紫外xiaodu，并準(zhǔn)備預(yù)冷PBS等無菌試劑。

三、操作過程中的無菌規(guī)范

1、人員操作要求：操作人員需佩戴無菌手套、口罩，全程避免移液器槍頭接觸非無菌表面，若觸碰需立即更換。打開培養(yǎng)瓶或離心管時，瓶蓋需傾斜放置，避免內(nèi)壁污染。

2、實(shí)時監(jiān)控與質(zhì)控：提取后24小時內(nèi)需鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況，2-3天換液一次，及時清理漂浮死細(xì)胞及污染物。建立細(xì)胞培養(yǎng)記錄體系，記錄換液時間、細(xì)胞形態(tài)及污染跡象。?

四、培養(yǎng)基和kangshengsu

1、使用kangshengsu（如青霉素、鏈霉素）和兩性霉素B來預(yù)防微生物污染。

2、配置培養(yǎng)基時注意無菌操作，避免使用污染的容器和工具。

五、細(xì)胞房管理

1、保持細(xì)胞房的清潔和xiaodu，定期對培養(yǎng)箱進(jìn)行徹底清潔。

2、使用70%酒精或異丙醇溶液擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)部。

3、避免使用水浴鍋中的水作為細(xì)胞復(fù)蘇的介質(zhì)，可選擇金屬浴加熱設(shè)備減少污染風(fēng)險。

六、污染檢測與處理

1、定期檢查培養(yǎng)物，觀察細(xì)胞形態(tài)和培養(yǎng)基顏色變化。

2、發(fā)現(xiàn)污染跡象（如培養(yǎng)基變渾濁、細(xì)胞生長異常）應(yīng)立即停止培養(yǎng)并丟棄污染樣本。

3、對污染源進(jìn)行xiaodu處理，確保污染不會擴(kuò)散。

通過上述措施的綜合應(yīng)用，可顯著降低原代細(xì)胞提取過程中的支原體污染風(fēng)險，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的細(xì)胞材料。