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第2年
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PCR定量試劑盒DNA提取方式
日期：2025-11-01 20:41
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摘要：
可采用PCR定量試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說(shuō)明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的(DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
血液樣本：直接取200μl 抗凝血，轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml 離心管中，加入1ml 雙蒸水，劇烈震蕩30s，8000rpm 離心5min，棄上清，至無(wú)明顯紅色沉淀。(若沉淀明顯，請(qǐng)?jiān)僦貜?fù)上述步驟一次)。加入1ml生理鹽水，劇烈震蕩15s，13000rpm 離心5min，棄上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請(qǐng)室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl 進(jìn)行PCR 反應(yīng)。
肺、**結(jié)等固體組織：剪取約0.1g 組織，用生理鹽水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 轉(zhuǎn)移到勻漿器中勻漿。將勻漿液50μl 轉(zhuǎn)移到1.5mL 離心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前請(qǐng)室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl 進(jìn)行PCR 反應(yīng)。
乳液等液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm 離心3min，棄上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請(qǐng)室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議*后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。
血液樣本：直接取200μl 抗凝血，轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml 離心管中，加入1ml 雙蒸水，劇烈震蕩30s，8000rpm 離心5min，棄上清，至無(wú)明顯紅色沉淀。(若沉淀明顯，請(qǐng)?jiān)僦貜?fù)上述步驟一次)。加入1ml生理鹽水，劇烈震蕩15s，13000rpm 離心5min，棄上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請(qǐng)室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl 進(jìn)行PCR 反應(yīng)。
肺、**結(jié)等固體組織：剪取約0.1g 組織，用生理鹽水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 轉(zhuǎn)移到勻漿器中勻漿。將勻漿液50μl 轉(zhuǎn)移到1.5mL 離心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前請(qǐng)室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl 進(jìn)行PCR 反應(yīng)。
乳液等液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm 離心3min，棄上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請(qǐng)室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl進(jìn)行PCR反應(yīng)。
?注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議*后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。
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