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樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過(guò)濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 （通過(guò)過(guò)濾）。

4 ）. 通過(guò)加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

通用規(guī)則：

1、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

4、檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

7、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

優(yōu)點(diǎn)如下：

1、快速簡(jiǎn)便：全程約50分鐘，可測(cè)100例左右樣本。

2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測(cè)線(xiàn)粒體及微粒體中的SOD。

3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。

4、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個(gè)月有效。

5、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。

6、回收試驗(yàn)： X =103.3%。

7、受外界影響因素小：干擾因素少，重復(fù)性強(qiáng)。

8、測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等，效果均佳.

人肺癌；A549 [A-549]玉米黑粉菌胞漿-5′-核苷酸酶-Ⅱ抗體流式組化

人腎透明腺癌；786-0豌豆根瘤菌抗g-氨基丁酸B1受體抗體流式組化

人結(jié)腸癌；CaCo-2根瘤菌抗蚯蚓纖溶酶抗體流式組化/抗蚓激酶抗體流式組化

人肝癌；HepG2尖角凸臍蠕孢配對(duì)盒基因3抗體流式組化

人肝癌；Huh-7深層大洋芽孢桿菌甲狀腺素T4抗體流式組化

人神經(jīng)母瘤；SH-SY5Y假單胞菌己糖激酶

人膀胱移行癌；T-24釀酒酵母胰酶粉

人B白血?。籅ALL-1*禾谷鐮刀菌克克拉維酸鉀

小鼠源大腸埃希菌5-尿苷三磷酸二鈉鹽

小鼠T瘤；Cyc-Tag(S49)羊泰勒蟲(chóng)（崇信株）α-酮戊二酸

小鼠骨髓；FDC-P1凍干粉  厭氧亞硫酸鹽還原梭菌（定量） 甲酰

小鼠垂體瘤；GT1-1慢生根瘤菌環(huán)辛酮

小鼠胚胎成骨前體；MC3T3-E1香菇四乙基氯化銨

小鼠胚胎成纖維(來(lái)自NIH3T3)；PA12花腐鐮孢硼酸鎂

小鼠血；WEHI-3 [WEHI3]巴氏醋桿菌硅酸鈣
脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）活性測(cè)試盒磷化c-fos抗體戈米辛J Acid chrome blue K

磷化c-fos抗體戈米辛N Acid Fuchsin

磷化c-fos抗體戈米辛O Alizarin complexone

缺氧誘導(dǎo)因子1α抑制蛋白抗體格列風(fēng)內(nèi)酯 Alizarin complexone

肺鼠疫耶爾森氏F1莢膜蛋白抗體（N端）葛根 Arsenazo I

補(bǔ)體因子H抗體葛根素 Basic Fuchsin

促卵泡抗體葛根素-6''-O-木糖苷 Basic Fuchsin

神經(jīng)元核抗原抗體葛根素芹菜糖苷 Bromothymol blue

FAM135B蛋白抗體蛤蚧 Bismuthiol II

測(cè)定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準(zhǔn)確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便不時(shí)觀(guān)察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì)量和軟件的算法。