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						產品名稱
					 
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						規(guī)格
					 
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						原代星狀細胞培養(yǎng)體系
					 
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						100ml/500ml
					 
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						BH-X019953
					 
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		培養(yǎng)方法
	
	
		傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在顯微鏡下觀察,期間禁止搖晃培養(yǎng)皿,細胞剛有脫落時,則吸除大部分胰酶,留約0.5mL,移至培養(yǎng)箱消化,約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打均勻細胞,后可分3~6皿培養(yǎng);
	
	
		生長條件 37℃,5%CO2,CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培養(yǎng)液,含谷氨酰胺,含丙酮酸鈉。
	
	
		存儲條件 凍存則用6mL凍存液(90%FBS+10%DMSO)終止消化,吹打均勻,分為6支凍存管,用程序降溫盒于-80℃凍存,過夜轉移至液氮中保存。
	
	
		培養(yǎng)操作步驟 :
	
	
		1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 
	
	
		2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 
	
	
		3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 
	
	
		4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中; 
	
	
		5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 
	
	
		
實驗要點及說明:
	
	
		1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
	
	
		2.所使用的蓋玻片應該為玻璃**,并經過鉻酸洗液處理; 
	
	
		3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
	
	
		4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
	
	
		5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
	
	
		細胞培養(yǎng)方法:
	
	
		1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
	
	
		①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
	
	
		②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
	
	
		③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
	
	
		④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
	
	
		⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
	
	
		⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
	
	
		2、細胞復蘇:
	
	
		①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
	
	
		②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
	
	
		3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
	
	
		①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
	
	
		②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
	
	
		③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
	
	
		④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
	
	
		Subcellular Location : Nucleus. Cytoplasm.
	
	
		Similarity : Contains 4 C2H2-type zinc fingers.
	
	
		Contains 1 SET domain.
	
	
		Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: O75626.2
	
	
		英文名稱  Anti-PHF/Paired Helical Filaments 
	
	
		中文名稱  成對螺旋細絲蛋白抗體 
	
	
		別    名  Microtubule-associated protein tau; Neurofibrillary tangle protein; Paired helical filament-tau; PHF-tau; TAU_HUMAN. 
	
	
		濃    度  1mg/1ml 
	
	
		規(guī) 格  0.2ml/200μg
	
	
		抗體來源  Rabbit  
	
	
		克隆類型  polyclonal 
	
	
		交叉反應  Human, Mouse, Rat, Cow, Horse 
	
	
		產品類型  一抗    
	
	
		研究領域  神經生物學 信號轉導 Alzheimer's  
	
	
		蛋白分子量  predicted molecular weight: 79kDa 
	
	
		性    狀  Lyophilized or Liquid 
	
	
		免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human Paired Helical Filaments 
	
	
		亞    型  IgG 
原代星狀細胞培養(yǎng)體系異連蛋白結合蛋白1檢測試劑盒N-甲基嗎啉 用于蛋白質測序, ≥99.8% (GC)靛藍 分析標準品
	
	
		N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑盒甲基納迪克酸酐 95%2-羥基-3-萘甲酸  97%
	
	
		白蛋白加合物檢測試劑盒硬脂酸甲酯 CP,45%(GC)水楊酸甲酯 CP,98%
	
	
		異常凝血酶原檢測試劑盒2-吡啶甲酸 98%水楊酸 AR,99.5%
	
	
		D蛋白檢測試劑盒二酸鈉 99%水楊酸 CP,99.0%
	
	
		羧肽酶檢測試劑盒錫酸鈉 CP,53.67% SnO2水楊酸 ACS, ≥99.0% 
	
	
		抗抗體檢測試劑盒癸二酸 CP,98.0%水楊酸 Ph. Eur., BP, USP, 99.5-100.5%