培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

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培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存條件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

產(chǎn)品介紹 Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is a 28kDa nuclear protein associated with the cell cycle, a nuclear protein vital for cellular DNA synthesis. Proliferating cell nuclear antigen was originally identified by immunofluorescence as a nuclear protein whose appearance correlated with the proliferate state of the cell. PCNA is required for replication of DNA in vitro and has been identified as the auxiliary protein (cofactor) for DNA polymerase delta. The anti-PCNA antibodies react with the nuclei of proliferating cells. PCNA is essential for cellular DNA synthesis and is also required for the in vitro replication of simian virus 40 (SV40) DNA where it acts to coordinate leading and lagging strand synthesis at the replication fork. The PCNA protein may fulfil several separate roles in the cell nucleus associated with changes in its antigenic structure.

PCNA是一種僅在增殖細(xì)胞中合成或表達(dá)的核內(nèi)多肽，其表達(dá)和合成與細(xì)胞周期有關(guān)。主要表達(dá)于增殖細(xì)胞的S期、G1期和G2初期。 PCNA主要作為判斷各種惡性腫瘤(包括胃腸道癌腫、乳腺癌、、膀胱癌等)細(xì)胞增殖和其惡性程度的一種指標(biāo).

英文名稱  Anti-phospho-p107(Thr369)  

中文名稱  磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣蛋白p107抗體

別    名  RBL1(phospho T369); 107 kDa retinoblastoma-associated protein; Cellular protein 107; Cellular protein p107; CP107; MGC40006; p107; PRB1; RBL1; RBL1_HUMAN; Retinoblastoma like protein 1; retinoblastoma-like 1 (p107); Retinoblastoma-like protein 1.  

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg

抗體來(lái)源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

產(chǎn)品類型  一抗  磷酸化抗體   

研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 學(xué) 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白 表觀遺傳學(xué)  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 121kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human p107 around the phosphorylation site of Thr369
原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系惡性腦腫瘤缺失蛋白1檢測(cè)試劑盒分散紅1 分析標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸阿霉素 98%

S100鈣結(jié)合蛋白β檢測(cè)試劑盒直接黑38 Dye content，≥45 %(R)-(+)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯(lián)萘 98%

核酸酶檢測(cè)試劑盒3,4-二氯苯 98%(S)-(-)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯(lián)萘 98%

抗BP230抗體檢測(cè)試劑盒鄰苯二 AR，98%(±)-2,2'-雙-(二苯膦基)-1,1'-聯(lián)萘 98%

肺癌標(biāo)志物DR-70檢測(cè)試劑盒鄰苯二 99%，用于生化研究(R)-(-)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚二(三氟甲磺酸酯)  98%

生物素羧化酶檢測(cè)試劑盒鄰苯二（OPD） 99.5%1,1'-聯(lián)萘酚-2,2'-雙(三氟磺酸酯)  98%

音猬因子檢測(cè)試劑盒對(duì)苯二 AR，97%二苯基膦 95%

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

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