培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

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培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Similarity : Belongs to the glycosyl hydrolase 13 family.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P04746.2

    胰淀粉酶由胰腺以活性狀態(tài)排入消化道，是重要的水解碳水化合物的酶，和唾液腺分泌的淀粉酶一樣都屬于α-淀粉酶，作用于α-1，4糖苷鍵，對(duì)分支上的α-1，6糖苷鍵無(wú)作用，故又稱(chēng)淀粉內(nèi)切酶，其作用的適pH為6.9，可通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，是能在正常時(shí)于尿中出現(xiàn)的血漿酶。

    人體的其他組織如卵巢、輸卵管、肺、睪丸、精液、乳腺等的提取物中都發(fā)現(xiàn)有淀粉酶活性;血液、尿液、乳液中也含淀粉酶。血液淀粉酶中主要來(lái)自胰腺、唾液腺，尿液中淀粉酶則來(lái)自于血液.。當(dāng)罹患胰腺，或有胰腺外分泌功能障礙時(shí)都可引起其活性升高或降低，有助于胰腺的診斷。尿淀粉酶水平波動(dòng)較大，所以用血清淀粉酶檢測(cè)為好，或兩者同時(shí)測(cè)定。淀粉酶活性變化亦可見(jiàn)于某些非胰腺疾患。

英文名稱(chēng)  Anti-PDHA1/PDH-E1α

中文名稱(chēng)  丙酮酸脫氫酶α1抗體

別    名  mitochondrial; somatic form; ODPA_HUMAN; PDH; PDHA1; PDHCE1A; PDHE1 A type I; PDHE1-A type I; PHE1A; Pyruvate Dehydrogenase (lipoamide) alpha 1; Pyruvate Dehydrogenase E1 alpha; Pyruvate dehydrogenase E1 component subunit alpha; Pyruvate dehydrogenase E1 component subunit alpha, somatic form, mitochondrial.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg

抗體來(lái)源  Rabbit  

克隆類(lèi)型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

產(chǎn)品類(lèi)型  一抗    

研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 學(xué) 激酶和磷酸酶 線粒體  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 43kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human PDHA1

亞    型  IgG
腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞膽囊收縮素;縮膽囊素八肽檢測(cè)試劑盒三(羥甲基)氨烷醋酸鹽  99%2,2',7,7'-四溴-9,9'-螺二芴 98%

卵清蛋白檢測(cè)試劑盒三異環(huán)酸酯 98%1,3,5-苯酰氯 98%

高遷移率族蛋白B1-IgG抗體檢測(cè)試劑盒2-叔丁基-6-酚 98%1,1-環(huán)已基二乙酸 98%

高遷移率族蛋白B1-IgM抗體檢測(cè)試劑盒3-噻吩甲 98%1,1-環(huán)已基二乙酸單酰 99%

高遷移率族蛋白B1-IgA抗體檢測(cè)試劑盒單組分TMB顯色液 組成：TMB，穩(wěn)定劑。溴水 AR

抗卵巢抗體檢測(cè)試劑盒TMB顯色液A液溴水 CP

抗心磷脂抗體檢測(cè)試劑盒TMB顯色液B液 溴標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。