培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

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培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用??片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

產(chǎn)品介紹 PHD2 protein catalyzes the posttranslational formation of 4-hydroxyproline in hypoxia-inducible factor (HIF) alpha proteins. In the presence of oxygen, PHD2 converts specific prolyl residues in HIF alpha to hydroxyproline, leading to HIF alpha proteasomal degradation via the von Hippel-Lindau ubiquitylation complex. Low oxygen levels, sensed at the cellular level, cause the HIF conversion to be reduced so that HIF levels are stable. This results in increased angiogenesis as HIF1 alpha regulates the expression of many angiogenesis-related genes.

Subcellular Location : Cytoplasm. Nucleus.

Tissue Specificity : According to PubMed:11056053, widely expressed with highest levels in skeletal muscle and heart, moderate levels in pancreas, brain (dopaminergic neurons of eart, brain, lung and liver and fetal brain, heart spleen and skeletal muscle.

Similarity : Contains 1 Fe2OG dioxygenase domain.

Contains 1 MYND-type zinc finger.

英文名稱  Anti-PML/TRIM19

中文名稱  早幼粒細胞白血病蛋白抗體

別    名  PML Protein; MYL; PML; PML_HUMAN; PP8675; Probable transcription factor PML; Promyelocytic leukemia; Promyelocytic leukemia inducer of; Promyelocytic leukemia protein; Protein PML; RING finger protein 71; RNF 71; RNF71; TRIM 19; TRIM19; Tripartite motif containing protein 19; Tripartite motif protein TRIM19; Tripartite motif-containing protein 19.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow

產(chǎn)品類型  一抗    

研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 學 細胞凋亡 細胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 97kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human PML/TRIM19
胸腺成纖維細胞膳食纖維檢測試劑盒N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽 98%4-羥基-3-甲基吡啶 97%

膜聯(lián)蛋白-V檢測試劑盒2-溴芴 97%異喹諾酮 98%

生激表達基因2蛋白檢測試劑盒2,2'-聯(lián)喹啉-4,4'-二甲酸二鈉 98%3-甲基-4-氨基吡啶 98%

Artemin蛋白檢測試劑盒N,N-雙(2-羥乙基)甘氨酸 BC 甲基吡咯-2-羧酸酯 98%

5羥色2B受體檢測試劑盒CAPSO單鈉鹽 99%1-甲基咪唑-5-甲酸 95%

胰高血糖素樣肽檢測試劑盒3-(環(huán)已)-2-羥基-1- 99%對異酸酯 98%

微囊藻素檢測試劑盒3-(環(huán)已)-2-羥基-1- 99.5%4-硝基吡唑 97%

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。