細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

冷凍保存細胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培養(yǎng)操作：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

細胞處理方法：

以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度，細胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術指導。

一．貼壁細胞

客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二．懸浮細胞

1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)。

Function : Phosphoinositide-3-kinase (PI3K) that phosphorylates PtdIns(4,5)P2 (Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate) to generate phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate (PIP3). PIP3 plays a key role by recruiting PH domain-containing proteins to the membrane, including AKT1 and PDPK1, activating signaling similarity).

Subcellular Location : Cytoplasm. Cell membrane.

Tissue Specificity : Pancreas, skeletal muscle, liver and heart.

Similarity : Belongs to the PI3/PI4-kinase family.

Contains 1 C2 PI3K-type domain.

Contains 1 PI3K-ABD domain.

Contains 1 PI3K-RBD domain.

Contains 1 PI3K/PI4K domain.

Contains 1 PIK helical domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P48736.3

英文名稱  Anti-Phospho-Paxillin(Ser83)

中文名稱  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體

別    名  PXN(phospho S83); Paxillin (phospho S83); Paxillin (phospho Ser83); p-Paxillin (Ser83); Paired box protein Pax 1; PAX 1; PAX1; Paxillin alpha; PXN; PXN protein; FLJ16691; FLJ23042; FLJ16691; PAXI_HUMAN; Paxillin; PXN protein.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal
腹腔主動脈外膜成纖維細胞血管內皮生長因子A檢測試劑盒氫氧化鍶 99.5%3,5-雙（三氟甲基）苯酸 97%

血管內皮生長因子B檢測試劑盒氧化鎘 AR,99%3-芐氧基-2,6-二氟苯酸 97%

血管內皮生長因子C檢測試劑盒氧化鎘 CP,98.5%2-丁氧基苯酸 97%

血管內皮蛋白C受體檢測試劑盒氧化鎘 99.99% metals basis4-溴-2-(三氟甲基)苯甲 97%

血管內皮生長因子檢測試劑盒鎘 AR,99.0%4-溴-2-三氟酚 99%

血管內皮生長因子受體1檢測試劑盒鎘 SP4-芐氧基-3-氯苯酸 98%

血管內皮生長因子受體2檢測試劑盒鎘 99.98%，powder,粒徑:10±5μm5-基-2-氟苯酸 97%