培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長(zhǎng)條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

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培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

保存條件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

產(chǎn)品介紹 PIM1 is a member of the serine/threonine kinase PIM oncogene family. PIM1 has been implicated in lymphomagenesis, cell proliferation, apoptosis, differentiation and tumourigenesis. The PIM1 protein kinase is upregulated in prostate cancer.

The Pim family serine/threonine protein kinases were first identified in studies examining genes targeted for proviral insertion in murine leukemia virus-induced T lymphomas. Increased levels of Pim kinases Subcellular Location : Isoform 2: Cytoplasm. Nucleus. Isoform 1: Cell membrane.

Tissue Specificity : Expressed primarily in cells of the hematopoietic and germline lineages. Isoform 1 and isoform 2 are both expressed in prostate cancer cell lines.

Post-translational modifications : Autophosphorylated on both serine/threonine and tyrosine residues. Phosphorylated. Interaction with PPP2CA promotes dephosphorylation.

Ubiquitinated, leading to proteasomal degradation.

Similarity : Belongs to the protein kinase superfamily. CAMK Ser/Thr protein kinase family. PIM subfamily.

Contains 1 protein kinase domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: Q86V86.3 UniProtKB/Swiss-Prot: P11309.3

英文名稱  Anti-Pumilio 2

中文名稱  PUM2蛋白抗體

別    名  FLJ36528; KIAA0235; MGC138251; MGC138253; PUM 2; Pum2; PUM2; PUMH2; Pumilio (Drosphila) homolog 2; Pumilio homolog 2 (Drosophila); Pumilio homolog 2; Pumilio2; PUM2_HUMAN.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg
豬肺泡巨噬細(xì)胞神經(jīng)氨酸酶檢測(cè)試劑盒2,4-二氯苯氧乙酸 97%抑肽酶 3-8 TIU/mg

神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白檢測(cè)試劑盒2,4-二氯苯氧乙酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品α-糜蛋白酶 1000 usp u/mg

神經(jīng)節(jié)苷脂M3抗體檢測(cè)試劑盒2,4-二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L，基體：甲色素C 95%

神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子檢測(cè)試劑盒2,5-二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml，溶劑：甲DNA酶 ≥300 Kunitz units/mg protein

神經(jīng)生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒2,4-二氯苯氧乙酸 用于植物培養(yǎng), ≥98%（GC)DNA酶 ≥2,000 Kunitz units/mg protein

神經(jīng)絲蛋白檢測(cè)試劑盒過(guò)氧化脲素 97%彈性蛋白酶 30 units/mg

神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1檢測(cè)試劑盒銨 AR,99.0%透明質(zhì)酸酶 ≥ 300 IU/mg

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。