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培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

產(chǎn)品介紹 Human organic anion transporter (OAT) 3 (SLC22A8) is localized to the basolateral membranes of renal tubular epithelial cells and plays a critical role in the excretion of anionic compounds. Recent advances in molecular biology have identified three organic anion transporter families: the organic anion transporter (OAT) family encoded by SLC22A, the organic anion transporting peptide (OATP) family encoded by SLC21A (SLCO), and the multidrug resistance-associated protein (MRP) family encoded by ABCC. These families play critical roles in the transepithelial transport of organic anions in the kidneys as well as in other tissues such as the liver and brain. Among these families, the OAT family plays the central role in renal organic anion transport. Knowledge of these three families at the molecular level, such as substrate selectivity, tissue distribution, and gene localization, is rapidly increasing.

Function : Plays an important role in the excretion/detoxification of endogenous and exogenous organic anions, especially from the brain and kidney. Involved in the transport basolateral of steviol, fexofenadine. Transports benzylpenicillin (PCG), estrone-3-sulfate (E1S), cimetidine (CMD), 2,4-dichloro-phenoxyacetate (2,4-D), p-amino-hippurate (PAH), acyclovir (ACV) and ochratoxin (OTA).

Subcellular Location : Basolateral cell membrane; Multi-pass membrane protein (Potential). Note=Localizes on the brush border membrane of the choroid epithelial cells. Localizes to the basolateral membrane of the proximal tubular cells. Localizes on the abluminal and possibly, luminal membrane of the brain capillary endothelial cells (BCEC) (By similarity).

Tissue Specificity : Expressed in kidney.

Similarity : Belongs to the major facilitator (TC 2.A.1) superfamily. Organic cation transporter (TC 2.A.1.19) family.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: Q9R1U7.1

OAT3陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是一類分布廣泛的膜蛋白，通過介導(dǎo)Cl－／HCO－3跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)參與細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞體積及細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度的調(diào)節(jié)。

英文名稱  Anti-ox-LDL

中文名稱  氧化低密度脂蛋白抗體

別    名  ox-LDL: Cu2SO4 oxidized low density lipoprotein; oxidized low density lipoprotein; Low density lipoprotein; MDA oxidized LDL; MDA oxidized low density lipoprotein; OLR1_HUMAN; Oxidized low-density lipoprotein receptor 1; Ox-LDL receptor 1; C-type lectin domain family 8 member A; Lectin-like oxidized LDL receptor 1; LOX-1; Lectin-like oxLDL receptor 1; hLOX-1; Lectin-type oxidized LDL receptor 1; Oxidized low-density lipoprotein receptor 1, soluble form..

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg  1mg/1mg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human

產(chǎn)品類型  一抗    

研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 學(xué) 脂蛋白  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 31kDa
大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞硫酸類肝素檢測試劑盒1-辛 ≥92%, FCC吡咯 99%

硫酸軟骨素N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶-1檢測試劑盒1-辛 natural, ≥92%, FCC(±)-四氫糠 97%

硫酸脫氫表雄酮檢測試劑盒丁酸酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)N-甲基-3-氨基吡唑 97%

硫酸乙酰肝素檢測試劑盒丁酸酯 99%2-氨基-3,5-二溴吡 97%

硫酸乙酰肝素酶檢測試劑盒丁酸酯 98%4-(氨基)-1-甲基吡唑 98%

硫酸轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒軟脂酸 standard for GC, ≥99% (GC)(5R)-5-(疊氮甲基)-3-(3-氟苯基)-2-惡唑烷酮 98%

硫氧還蛋白還原酶檢測試劑盒軟脂酸 AR2-氨基-5-溴吡 98%