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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞
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1×106
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BH-X019698
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培養(yǎng)方法
傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；
生長(zhǎng)條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。
存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
Tissue Specificity : Bone. Found in plasma.
Similarity : Belongs to the osteopontin family.
信號(hào)傳導(dǎo)（Signaling Intermediates）
骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種含精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸(Arg-Gly-Asp，RGD)的分泌型糖基化磷蛋白，已歸類于細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)蛋白。 OPN既是細(xì)胞因子，又是細(xì)胞黏附分子.又稱：分泌性磷酸化蛋白質(zhì)1
OPN初是從骨組織分離的，而后在上皮細(xì)胞、胃腸道的分泌物、腎、甲狀腺、睪丸以及一些腫瘤細(xì)胞里都陸續(xù)的發(fā)現(xiàn)了OPN的表達(dá)。在生殖方面，OPN在分泌期內(nèi)膜上皮細(xì)胞、侵襲的滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞中表達(dá)。
英文名稱 Anti-OPN/BSP
中文名稱 骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)
別 名 osteopontin; BNSP; Bone sialoprotein 1; BSP I; BSPI; Early T lymphocyte activation 1; ETA 1; ETA1; MGC110940; Nephropontin; OPN; Secreted phosphoprotein 1; SPP 1; SPP1; Urinary stone protein; Uropontin; OSTP_HUMAN.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Mouse, Rat
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 34kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from mouse OPN C-terminus
小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體檢測(cè)試劑盒乙酸正己酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC) 椰子 98%, FCC, Kosher
可溶性間粘附分子1檢測(cè)試劑盒酸葉酯 97%橙花 97%
可溶性胸苷激酶1檢測(cè)試劑盒柳酸己酯 98%乙位萘乙 99%
可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1檢測(cè)試劑盒己酸異戊酯 98%乙位萘乙 食品級(jí),Kosher
可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體檢測(cè)試劑盒異戊酸異戊酯 98%反,反-2,4-壬二烯 >85.0%(GC)
可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1檢測(cè)試劑盒異丁酸 standard for GC, ≥99.5% (GC)正壬 96%
可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2檢測(cè)試劑盒異丁酸 ≥99%, FCC正壬 ≥95%, FCC, Kosher, FG
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