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培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉移至液氮中保存。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

Entrez Gene: 4982 Human

Omim: 602643 Human

SwissProt: O00300 Human

Unigene: 81791 Human

護骨素又稱護骨因子(osteorotegenin,OPG)、骨保護蛋白、破骨細胞**抑制因子、骨保護素、破骨細胞抑制**因子（osteoclastogenesis inhibitory factor，OCIF）

OPG屬于TNF受體超家族，主要功能是抑制破骨細胞的分化、成熟破骨細胞的骨吸收活性，并誘導其凋亡。

英文名稱  Anti-OPGL/RANKL/ODF

中文名稱  骨保護蛋白配體抗體(破骨細胞分化因子)

別    名  CD254; hRANKL2; ODF; OPGL; Osteoclast differentiation factor; Osteoprotegerin ligand; RANKL; Receptor activator of nuclear factor kappa B ligand; sOdf; SOFA; TNF related activation induced cytokine; TNFSF 11; TNFSF11; TRANCE; Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11; Osteoprotegerin Ligand; TNF11_HUMAN.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat, Dog

產品類型  一抗    

研究領域  腫瘤 細胞生物 學 發(fā)育生物學  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 35kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid
小鼠骨髓瘤細胞可溶性MHC-I鏈相關基因B檢測試劑盒丁香酚 ≥98%, FCC, Kosher, FG鈴蘭 97%

可溶性OX40配體檢測試劑盒丁香酚 分析標準品，>99.5%(GC)丁香酚甲 98%

可溶性P選擇素檢測試劑盒丁香酚 natural, ≥98%, FCC丁香酚甲 ≥98%,FCC

可溶性sCD146分子檢測試劑盒月桂酸乙酯 99%甜瓜 80%

可溶性生激表達基因2蛋白檢測試劑盒辛酸乙酯 natural, ≥98%, FCC甲基柏木酮

可溶性Toll樣受體6檢測試劑盒戊酸乙酯 分析標準品，≥99.7% (GC)5-甲基-2-己酮 99%

可溶性T球蛋白粘蛋白分子3檢測試劑盒戊酸乙酯 ≥98%, FG4-甲 99%