冷凍保存細(xì)胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復(fù)）

 not yet tested in other applications.

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存條件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

產(chǎn)品介紹 Expression of the POU-domain transcription factor Octamer-4 (Oct-4) is widely regarded as a hallmark of pluripotent stem cells. The relationship of Oct-4 to pluripotent stem cells is indicated by its tightly restricted expression to undifferentiated pluripotent stem cells. Upon differentiation to somatic lineages, the expression of Oct-4 disappears rapidly. Unlike the majority of pluripotent stem cell markers, the biological role of Oct-4 has been well characterized. Studies performed in mice point to the critical role of Oct-4 in the establishment and/or maintenance of pluripotent stem cells in an uncommitted state.

Function : Transcription factor that binds to the octamer motif (5'-ATTTGCAT-3'). Forms a trimeric complex with SOX2 on DNA and controls the expression of a number of genes involved in embryonic development such as YES1, FGF4, UTF1 and ZFP206. Critical for early embryogenesis and for embryonic stem cell pluripotency.

Subunit : Interacts with UBE2I and ZSCAN10 (By similarity). Interacts with PKM2. Interacts with WWP2.

Subcellular Location : Cytoplasm.Nucleus.Note=Expressed in a diffuse and slightly punctuate pattern.

Tissue Specificity : Expressed in developing brain. Highest levels found in specific cell layers of the cortex, the olfactory bulb, the hippocampus and the cerebellum. Low levels of expression in ***** tissues.

Post-translational modifications : Sumoylation enhances the protein stability, DNA binding and transactivation activity. Sumoylation is required for enhanced YES1 expression (By similarity).

Ubiquitinated; undergoes 'Lys-63'-linked polyubiquitination by WWP2 leading to proteasomal degradation (By similarity).

ERK1/2-mediated phosphorylation at Ser-111 promotes nuclear exclusion and proteasomal degradation. Phosphorylation at Thr-235 and Ser-236 decrease DNA-binding and alters ability to activate transcription.

Similarity : Belongs to the POU transcription factor family. Class-5 subfamily.

Contains 1 homeobox DNA-binding domain.
小鼠前列腺癌細(xì)胞抗乙型肝炎病表面抗體檢測試劑盒棕櫚酸乙酯 ≥98%, FG吲哚 99%

抗載脂蛋白抗體A1檢測試劑盒肉桂酸乙酯 98%吲哚 ≥99%, FCC, Kosher

抗中性粒胞漿抗體檢測試劑盒肉桂酸乙酯 99%異丁酯 99%

抗中性粒核周抗體檢測試劑盒戊酸乙酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)異丁香酚(正+反) 97%

抗中性?？贵w檢測試劑盒戊酸乙酯 98%乙?；惗∠惴?≥98%, FCC

抗中性?？贵w檢測試劑盒菠蘿酸乙酯 99%乙酸異龍腦酯 90%

顆粒酶B檢測試劑盒乳酸乙酯 standard for GC，≥99.0% (GC) 乙位紫羅蘭酮 97%
細(xì)胞處理方法：

以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細(xì)胞密度，細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)。

一．貼壁細(xì)胞

客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二．懸浮細(xì)胞

1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)。