樣本收集及儲存:
1. 細胞培養(yǎng)上清:
將細胞培養(yǎng)基移至無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本:
室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本:
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
公司產(chǎn)品僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
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產(chǎn)品名稱
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分泌型磷脂酶A2試劑盒
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規(guī)格
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48T/96T
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貨號
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BH-0012094
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保存條件:2-8℃(長期不使用時,部分試劑應(yīng)放在-20℃條件下)。
有效期:6個月
存儲運輸:低溫避光,請勿重壓,輕拿輕放(現(xiàn)貨供應(yīng),一般為快遞運輸,江浙滬隔天到,外地及偏遠地方三至五天時間到貨。)
Elisa試劑盒可測種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞???鴨、魚等。
Elisa試劑盒適用范圍:此試劑盒僅用于科研實驗,禁用于臨床。
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2400 ng/L
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5 號標準品
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150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
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1200ng/L
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4 號標準品
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150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
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600ng/L
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3 號標準品
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150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
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300ng/L
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2 號標準品
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150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
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150ng/L
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1 號標準品
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150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
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組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100 ng/ml,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)后,分別稀釋成100 ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 ng/ml標準品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
4. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(100ul/孔),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul檢測溶液A加990ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

操作步驟:
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
樣本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
磷酸化含ETS域Elk1蛋白人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白Bphospho-ETS domain-containing protein Elk-1
克氏錐蟲抗體大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3Trypanosomacruzi antibody
細小病人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白Aparvovirus
禽流感病H5亞型抗體大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1AIV-H5-Ab
核糖核酸IgG抗體人前病整合位點1Anti-RNA IgG
雌二酮大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4Estradio
兒茶酚雌大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體Catechol Estrogen
β-羥基丁酸人綠膿桿菌外素Abeta-hydroxybutyric Acid
雙核精氨酸酶人流感病AArginase
錳過氧化氫酶大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物Mn Cat
磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1;2大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體phospho-extracellular signal-regulated kinase 1;2
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶人乙型肝炎表面抗原phospho-mitogen activited protein kinase
分泌型卷曲相關(guān)蛋白4人抗乙型肝炎病核心抗體Secreted frizzled-related protein 4
分泌型卷曲相關(guān)蛋白5大鼠白介素12Secreted frizzled-related protein 5
羥甲基戊二酸單酰輔酶A人抗乙型肝炎病核心IgM抗體HMG-CoA
分泌型磷脂酶A2試劑盒月桂酸甲酯 99%鄰苯二甲 Standard for GC, ≥99.5% (GC)Anti-E.coli DH-5 Alpha DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體
月桂酸甲酯 Standard for GC,≥99.5% (GC)1,2-二氯烷 99%Anti-E.coli O157:H7 大腸桿菌埃希氏菌O157抗體(腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7)
十二酸甲酯 分析標準品異佛爾酮 97%Anti-EPEC/E.coli 腸致病性大腸桿菌抗體
甲基環(huán)戊烯酮 98%四氯乙烯 Standard for GC, ≥99.9% (GC) Anti-E.coli/EPEC 抗普通大腸埃希菌菌體蛋白抗體
3-甲基戊酸 99%四氯乙烯 AR,98%Anti-E.coli O139 抗志賀素大腸桿菌O139抗體(仔豬水腫病志賀素大腸桿菌O139)
3-甲基戊酸 ≥98%, FG四氯乙烯 CP,97%Anti-EP3 前列腺素E受體3抗體
鄰甲酸甲酯 99%四氯乙烯 GR,99.5%Anti-Ephrin A1 EphA1抗體
基苯甲酸甲酯 ≥98%, FCC,FG四氯乙烯標準溶液 1000μg/ml,溶劑:甲Anti-EphA4 酪氨酸蛋白激酶A4抗體